On the chemistry of phorbol. V. On some ethers of phorbol

Full text of DOI:10.1515/znb-1968-1107

Zur Chemie des Phorbols, V 1
Über einige Äther des Phorbols 2
G e r t K r e ib ic h
* u n d E r ic h H e c k e r
Biochemisches Institut des Deutschen Krebsforschungszentrums, Heidelberg
(Z. Naturforschg. 23 b, 1444—1452 [1968]; eingegangen am 17. August 1968)
In phorbol and partial acetates of phorbol the hydroxyl groups in the 20-, 13-, 12- and 4-posi-
tions can be etherified with one of the following methods: diazoalkane/Al-i-propylate, tritylchloride/
pyridine and methyl-iodide/silveroxide. The investigation of suitable phorbol ethers with Feh-
1i n g’s and T o 11en s’ reagent proves that the tertiary hydroxyl at the cyclopropane ring is solely
responsible for the reducing properties of phorbol. Thus, phorbol is the first natural compound in
which this reaction of tertiary cyclopropanols was detected.
Die a,/3-ungesättigte Carbonylgruppe des Phorbols
kann nicht mit dessen reduzierender Wirkung gegen-
über F e h l i n g scher Lösung und T o 11en s’ Rea-
genz im Zusammenhang steheni. Deshalb ist zu
prüfen, ob im Phorbol mit diesen Reagenzien oxy-
dierbare Hydroxylgruppen enthalten sind. Eine
zweifelsfreie Entscheidung darüber, welche der
Hydroxylgruppen (a) —(e) des Phorbols für sein
Reduktionsvermögen verantwortlich ist (vgl. Partial-
strukturen 1 —3 sowie Strukturelemente 4 1-6) läßt
sich mit Phorbol-esZem nicht herbeiführen. Daher
werden die Möglichkeiten zur selektiven Verätherung
von Phorbol geprüft.
ebenso wie seine Derivate mehr oder weniger hitze-,
säure- und basenempfindlich ist. Eher kann eine
durch Lewis- Säuren wie Aluminiumtrichlorid oder
Bortrifluorid katalysierte Verätherung mit Diazoal-
kanen bei Raumtemperatur7 in Betracht gezogen
werden (vgl. dazu auch 1 . c. 8).
A1C13 zersetzte jedoch Phorbol-12.13.20-triacetat
bereits bei Raumtemperatur und schied außerdem, wie
BF3-Ätherat, wegen der starken Polymethylenbildung
aus.
Geeignet ist Al-£-propylat9, das mit Phorbol in
Tetrahydrofuran nur wenig Zersetzungsprodukte
bildet. Audi ist bei gleichzeitiger Anwesenheit des
Diazoalkans die Verätherung des Phorbols gegen-
über der Polymethylenbildung begünstigt. Unter
schwach basisdien Bedingung erweist sich die Be-
handlung von Phorbol-Derivaten mit dem milden
Methylierungsmittel Methyljodid/Silberoxid10 als
brauchbare Verätherungsmethode. Eine Übersicht
über die mit diesen Methoden dargestellten Äther
■^~0H(d)
^
0 H(e)
2 + C H 3
1
2
3
4
Verätherung von Phorbol
Zur Verätherung von Phorbol scheiden die meisten
der klassischen Methoden aus, da dieses Diterpen des Phorbols und seiner Derivate gibt Tab. 1.
* Teil der Dissertation G. K reibich, Heidelberg 1968.
1 IV. Mitt.: H . U. S ch aire r, H . W. T hielm ann, M. Gschw endt,
G . K re ibich , R. Schm idt u. E. H ecker, Z. Naturforschg.
23b, 1430 [1968], voranstehend.
4 E. H e c k e r, „Molekulare Biologie des malignen Wachs-
tums“, 17. Colloquium der Gesellschaft für Physiologische
Chemie, Springer Verlag, Berlin-Heidelberg-New York
1966, S. 105.
5 E. H e c k e r , H . B a r ts c h , M . G s ch w e n d t, E. H ä r le , G . K r e i-
b ic h , H . K u b in y i, H . U. S c h a ir e r , Ch. v. S zczep an ski, H . W.
T h ie lm a n n , Tetrahedron Letters [London] 33,3165 [1967].
8 E. H e c k e r , Ch. v. S zcze p an sk i, H . K u b in y i, H . B re s c h , E.
2 Über einen Teil der hier ausführlich mitgeteilten Ergeb-
nisse wurde bereits kurz berichtet: vgl. I.e. 1 (dort Fuß-
note5’6) und 1.c. 3-5 sowie ferner G. Kreibich u . E. Hecker,
100. Jahrestagung der Gesellschaft Deutscher Chemiker,
Berlin, 18.—23. 9. 1967, vgl. Angew. Chem. 79, 993
[1967], Angew. Chem. intern, ed. 6, 973 [1967] und 2.
Symposion des Deutschen Krebsforschungszentrums, Hei-
delberg, 25.-27. 9. 1967, vgl. „Aktuelle Probleme aus dem
Gebiet der Cancerologie II“, Springer Verlag, Berlin-Hei-
delberg-New York 1968, S. 155.
H
ä r le , H . U. S c h a ir e r u. H . B a r ts c h , Z . Naturforschg. 21b,
1204 [1966].
7 E.
M
ü lle r , H . K e s s le r u. B . Z e ch , Fortschr. chem. Forsch.
7/1,128 [1967].
8 E. H e c k e r u . R. L a t t r e l l , Chem. Ber. 96, 639 [1963].
9 A. P o p e la k u. G. L e tte n b a u e r , Arch. Pharmaz. Ber. dtsch.
pharmaz. Ges. 295, 427 [1962].
10 R. K u h n , H . T ris c h m a n n u. I. L ö w , Angew. Chem. 67, 32
[1955].
3
H . B artsch, H . Bresch, M. Gschw endt, E. H ä r le , G . K re i-
bich, H . K ubinyi, H . U. S chairer, Ch. v. Szczepanski, H . W.
T hielm ann u. E. H ecker, Z. analyt. Chem. 221, 424 [1966].
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20-0-Methyl-
phorbol-12.13-
diacetat (5)
20-0-Methyl-
phorbol-9.12.13-
triacetat (6)
Bisdehydro-
phorbol-12.20-
diacetat (10)
t
t
t
©
©
©
©
Phorbol-12.13-
diacetat11
Phorbol-9.12.13-
triacetat
Phorbol-12.20-
diacetat11
Phorbol-13.20-
dimethyläther (7)
©
Phorbol-20-
trityläther 12
Phorbol-13.20-
diacetat11
P h o r b o l 6
©-
©
©
I
1
12-O-Äthyl-phor-
bol-20-trityl-
äther (9)
13-O-Äthyl-phor-
bol-20-trityl-
äther (8)
Phorbol-12.13.20-
triacetat 8>11
4-0-Methyl-phor-
bol-13.20-
diacetat (13)
Phorbol-12-
äthyläther (11)
i
i
4.13-Di-O-methyl-
phorbol-12.20-
diacetat (16)
4-O-Methyl-phor-
bol-12.13.20-
triacetat (14)
4-O-Methyl-phor-
bol-12.13-
diacetat (15)
1
12-0 -Äthyl-phor-
bol-13.20-
diacetat (12)
Tab. 1. Ubersidit über die dargestellten Äther des Phorbols. Linke Seite: Umsetzung von Phorbol, übriger Teil: Umsetzung
von Phorbol-Derivaten mit © Tritylchlorid/Pyridin, Diazoalkan/Al-i-propylat, ® CH3J/Ag20/Dimethylform-
amid (DMF) ©I CH3J/Ag20/Essigester. Hier erstmals beschriebene Verbindungen sind mit arabischen Ziffern bezeichnet.
=
©
=
=
=
Verätherung der primären Hydroxylgruppe (a) an
C-20. Die Umsetzung von Phorbol bzw. von Phorbol-
Derivaten mit freier primärer Hydroxylgruppe (a)
(vgl. 2) mit Tritylchlorid/Pyridin führt in guten
Ausbeuten zu den entsprechenden Trityläthern 12. Die
Abspaltung des Tritylrestes gelingt in befriedigender
Weise mit heißer Essigsäure12. Fast alle der bisher
dargestellten Trityl-Derivate des Phorbols sind Harze.
Durch Umsetzung von Phorbol-12.13-diacetat11
bzw. von Phorbol-9.12.13-triacetat1 mit Diazome-
Umsetzung von Phorbol-12.13-diacetat11 mit Me-
thyljodid/Silberoxid in Essigester führt ebenfalls zu
20-0-Methyl-phorbol-12.13-diacetat (5).
Aus 20-0-Methyl-phorbol-9.12.13-triacetat (6 ) wird
mit Acetanhydrid/p-Toluolsulfonsäure unter Ersatz
der Methoxygruppe Phorbolpentaacetat erhalten. Dies
ist verständlich, da Allyläther in protonenkatalysierter
Reaktion wesentlich schneller als die entsprechenden
gesättigten Äther gespalten werden (vgl. z. B. 1. c.13).
Verätherung der tertiären Cyclopropanhydroxyl-
than/Al-i-propylat in Diäthyläther wird 20-0-Methyl- gruppe (c). Setzt man Phorbol in Tetrahydrofuran
phorbol-12.13-diacetat (5) bzw. 20-0-Methyl-phor-
bol-9.12.13-triacetat (6 ) erhalten (vgl. Tab. 1). Auf der Hydroxylgruppe (a) auch (c) veräthert: Man
mit Diazomethan/Al-i-propylat um, so wird außer
analoge Weise wird in dem weiter unten beschrie-
benen 4-0-Methyl-phorbol-12.13-diacetat (15) die
primäre Hydroxylgruppe (a) zum 4.20-Di-0-methyl-
kann außer mehreren Nebenprodukten den Phorbol-
13.20-dimethyläther (7) * isolieren. Phorbol-12.13.
20-triacetat ist unter diesen Bedingungen nicht ver-
phorbol-12.13-diacetat methyliert (vgl. Versudisteil). ätherbar.
11 Ch. v. S zczep an ski, H . U. S c h a ir e r , M. G s c h w e n d t u . E.
H e c k e r, Liebigs Ann. Chem. 705, 199 [1967].
13 B. W. T ro n o w u . L . W. L a d ig in a , Ber. dtsch. chem. Ges. 62,
2844 [1929].
12 H. B re s c h , G . K r e ib ic h , H. K u b in y i, H. U. S c h a ir e r , H. W.
T h ie lm a n n u . E. H e c k e r, Z. Naturforschg. 23b, 538 [1968].
* Auf Grund der bisher vorliegenden Befunde kann Hydro-
xylgruppe (c) im Cyclopropanring noch nicht lokalisiert
werden (vgl. dazu loc. cit. u, sowie loc. cit. dort S. 1435).
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Im KMR-Spektrum von 7 erkennt man neben zwei
Singuletts bei 3,29 und 3,41 ppm (Methoxygruppen)
noch drei unscharfe Signale bei 1,8—3,2 ppm (aus-
tauschbar, Hydroxylgruppen). Die Verschiebung des
Singuletts von Ha-2 0 (4,0 nach 3,78 ppm) läßt erken-
nen, daß die primäre Hydroxylgruppe veräthert ist.
Die sekundäre Hydroxylgruppe (OH-12) muß frei
sein, da das Signal des geminalen Protons unverändert
bei 4,12 ppm (Dublett) liegt.
zweite Produkt mit dem größeren Rf-Wert ist der
12-0-Äthyl-phorbol-2O-trityläther (9). Sein KMR-
Spektrum unterscheidet sich von dem des stellungs-
isomeren 13-0-Äthyl-phorbol-20-trityläthers (8 ) vor
allem in der Verschiebung des Dubletts von H- 1 2
zu höherem Feld (4,1-> 3,6 ppm). Wenn man in
12-0-Äthyl-phorbol-20-trityläther den Tritylrest ab-
spaltet und den so gewonnenen Phorbol-12-äthyläther
(11) mit Acetanhydrid in Pyridin acetyliert, kann
das 12-0-Äthyl-phorbol-13.20-diacetat (12) als kri-
stalline Verbindung erhalten werden.
Die Umsetzung des reaktiveren Diazoäthans mit
Phorbol-20-trityläther unter analogen Bedingungen
führt zu zwei Hauptprodukten (8 +9). Die Ver-
bindung mit dem kleineren Rf-Wert läßt sichkristalli-
sieren und kann als 13-0-Äthyl-phorbol-2O-trityl-
äther (8 ) angesprochen werden: Im KMR-Spektrum
findet man die Protonen des Äthylrests als Multiplett
bei 3,5 ppm (-CH2-) bzw. als Triplett bei 1 , 2 ppm
(-CH3 , meist verdeckt).
Verätherung der tertiären Hydroxylgruppe (e) an
C-4. Während die freien Hydroxylgruppen (b), (d)
und (e) in Phorbol-13.20-diacetat mit Methyljodid/
Silberoxid in Essigester nicht reagieren, tritt an Hy-
droxylgruppe (e) mit demselben Reagenz und N,N-
Dimethylformamid als Lösungsmittel eine Umsetzung
ein. Das säulenchromatographisch gereinigte Reak-
tionsprodukt (13) ist ein Diacetat und zeigt als
auffälligste Veränderung im KMR-Spektrum das
Singulett einer Methoxygruppe.
Da Phorbol-12.13.20-triacetat unter diesen Bedin-
gungen nicht reagiert und das zur sekundären Hy-
droxylgruppe (b) geminale Proton im KMR-Spektrum
keine Verschiebung zeigt, muß das Cyclopropan-
hydroxyl (c) äthyliert sein. Das zweite Umsetzungs-
produkt (9) der Reaktion wird weiter unten identifi-
ziert.
Das Dublett von H-12 liegt unverändert bei 3,98
ppm, es kann also nur eine der beiden tertiären, mit
Acetanhydrid/Pyridin nicht veresterbaren Hydroxyl-
gruppen (d) oder (e) methyliert sein. Bemerkenswert
Versucht man die Hydroxylgruppe (c) in Phorbol-
12.20-diacetat mit Methyljodid/Silberoxid/Essigester
also unter analogen Bedingungen wie Phorbol-12.13- ist die Aufspaltung von H2-5 in ein AB-System. Beide
Protonen erscheinen beim Phorbol-12.13.20-triacetat
diacetat umzusetzen, so erhält man in einheitlicher
als Singulett. Auffällig ist ferner die Verschiebung der
Reaktion eine Verbindung, deren Analysendaten und
n —7r*-Bande des Enonsystems zu höheren Wellenlän-
len (232 —►248 nm).
Massenspektrum auf den Verlust von 2 H-Atomen
aus Phorbol-12.20-diacetat hinweisen. Im KMR-
Setzt man (13) mit Acetanhydrid/Pyridin um, so
Spektrum tritt das für Methoxyprotonen charakte-
wird 4-0-Methylphorbol-12.13.20-triacetat (14) er-
ristische Singulett nicht auf und das Dublett des
halten, das auch bei der Umsetzung von Phorbol-
Protons am Cyclopropanring (H-14) ist verschwun-
12.13.20-triacetat mit Methyljodid/Silberoxid//V,V-
den. Dagegen erscheinen im Bereich der Doppel-
Dimethylformamid entsteht. Durch säurekatalysierte
bindungsprotonen zwei neue Signale und bei etwa
Umesterung läßt sich 4-0-Methyl-phorbol-12.13.20-
1 , 8 ppm findet man ein Singulett, das im Vergleich
triacetat (14) in 4-0-Methyl-phorbol-12.13-diacetat
zum Ausgangsprodukt eine weitere Methylgruppe
(15) überführen.
an einer Doppelbindung anzeigt. Die Verbindung ist
Versuche zur Verätherung der tertiären Hydroxyl-
somit ein Bisdehydro-phorbol-12.20-diacetat (10),
gruppe (d) an C-9. Läßt man Methyljodid/Silber-
das auch bei der Oxydation von Phorbol-1 2 .2 0 -di-
oxid in V,V-Dimethylformamid längere Zeit auf
acetat mit Bleitetraacetat5 ’ 14 entsteht. Während sich
Phorbol-12.13.20-triacetat einwirken, so entsteht
Phorbol-12.20-diacetat mit Silberoxid allein prak-
neben dem oben beschriebenen 4-O-Methyl-phorbol-
tisch nicht dehydrieren läßt, wird mit Bleidioxid
12.13.20-triacetat (14) noch eine zweite Substanz in
größeren Mengen, die im Dünnschichtchromato-
ebenfalls (10) erhalten.
Verätherung der sekundären Hydroxylgruppe (b)
gramm einen kleineren Rf-Wert als das Ausgangs-
an C-l2. Das bei der Umsetzung von Phorbol-20-
produkt zeigt. Die Substanz ist nach KMR- und
trityläther mit Diazoäthan/Al-i-propylat gebildete
Massenspektrum als ein Di-0-methyl-phorbol-12.20-
14 M. G sc h w en d t u . E. h e c k e r , Angew. Chem. 7 9 ,994 [1967] ;
Angew. Chem. intern, ed. 6, 974 [1967] sowie M.
diacetat anzusprechen.
Aus Analogiegründen kann angenommen werden,
daß Hydroxylgruppe (e) methyliert ist. Für die
G
sc h w en d t u . E. h e c k e r , VIII. Mitt. dieser Reihe, Z. Natur-
forschg., im Druck.
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Die Reaktionsfähigkeit der Hydroxylgruppe (e)
bei basenkatalysierter Methylierung ist bemerkens-
wert. Sie entspricht vermutlich ihrer —gegenüber
zweite Methylgruppe stehen dann auf Grund der
KMR-Daten nur noch Hydroxylgruppe (c) oder (d)
zur Verfügung. Da die Verbindung mit Acetan-
hydrid/Pyridin nicht acetylierbar ist, kommt als Hydroxylgruppe (d) — raschen Freisetzung bei
freie Hydroxylgruppe nur das tertiäre Hydroxyl (d)
der basenkatalysierten Umesterung1 bzw. bei der
in Betracht. Offenbar wird also bei langzeitiger Ein- Acetylwanderung während der Reduktion von Phor-
wirkung von Methyljodid/Silberoxid/7V,V-Dimethyl-
formamid auf Phorbol-12.13.20-triacetat der Acetyl-
rest am Cyclopropanhydroxyl (c) durch eine Methyl-
gruppe verdrängt.
bolpentaacetat1. Zwar läßt sich die Hydroxylgruppe
(d) mit Acetanhydrid/p-Toluolsulfonsäure acety-
l ieren6, aber mit keiner der hier untersuchten
Reaktionen in nennenswertem Umfang alkylieren.
Hydroxylgruppe (e) sollte daher gegenüber Hy-
droxylgruppe (d) eine strukturelle Besonderheit
aufweisen.
Der Dimethyläther ist danach das 4.13-Di-O-
methyl-phorbol-12.20-diacetat (16). Hydroxylgruppe
(d) kann demnach auf diesem Wege nicht in erheb-
lichem Umfang methyliert werden.
Um zu prüfen, welche der Hydroxylgruppen des
Phorbols für seine reduzierenden Eigenschaften ver-
antwortlich ist, wurde das Verhalten der in Tab. 2
aufgeführten Phorboläther gegenüber Fehl ing-
scher Lösung und T o11en s’ Reagenz untersucht.
Zur Struktur des Phorbols
Aus den Ausbeuteverhältnissen der Äthylierung
von Phorbol-20-trityläther (vgl. Tab. 1) läßt sich
für das tertiäre Cyclopropanhydroxyl (c) und die
sekundäre Hydroxylgruppe (b) das Verhältnis der
Geschwindigkeitskonstanten zu 2,5 : 1 abschätzen.
Dies sowie der Befund, daß die Al-i-propylat-kataly-
sierte Umsetzung von Phorbol mit Diazomethan
beim Phorbol-13.20-dimethyläther (7) stehen bleibt,
zeigt, daß die sekundäre Hydroxylgruppe des Phor-
bols besonders reaktionsträge ist. Eine entsprechende
Abstufung der Reaktivität der Hydroxylgruppen (a),
(b) und (c) des Phorbols hatte sich auch aus Acety-
lierungs- und Umesterungsversuchen ergeben 11.
Tollens‘-
Reagenz
Substanz
Fehlingsche
Lösung
Phorbol
+
+
Phorbol-3-ol1
+ 1
+ 1
Phorbol-20-trityläther
Phorbol-13.20-dimethyläther
13-0-Äthyl-phorbol-20-
trityläther
+
+
0
0
0
0
12-0 -Äthyl-phorbol-20-
trityläther
+
+
Tab. 2. Reduzierende Wirkung von Phorbol, Phorbol-3-ol und
einigen Phorboläthem gegenüber F e h l i n g scher Lösung
und T o 11en s’ Reagenz (vgl. dazu auch 1. c.1_4).
Interessant ist, daß bei lang andauernder Einwir-
kung von Methyljodid/Silberoxid auf Phorbol-12.13.20-
triacetat in Dimethylformamid nicht, wie erwartet, der
Acetylrest an Hydroxylgruppe (a), sondern der an
Man erkennt, daß Phorboläther — ebenso wie
Phorbol und Phorbol-3-ol1 — nur dann reduzie-
Hydroxylgruppe (c) gegen eine Methylgruppe ausge- rend wirken, wenn die tertiäre Hydroxylgruppe
tauscht wird.
(c) frei vorliegt. Die reduzierende Wirkung des
Phorbols ist somit zweifelsfrei allein der tertiären
Cyclopropanolgruppierung (vgl. 2) und nicht einem
sekundären 1 .2 -Ketol15 zuzuschreiben. Damit werden
die Befunde, daß Phorbol T o 11en s’ Reagenz nicht
wie 1.2-Ketole bereits bei Raumtemperatur16, son-
dern erst in der Hitze17c reduziert, und daß auch
Phorbol-3-ol reduzierend wirkt1 sowie die oben be-
schriebene Dehydrierung von Phorbol-12.20-diace-
tat mit Methyljodid/Silberoxid bzw. Bleidioxid ver-
ständlich.
Es ist bemerkenswert, daß ein 12.13-Di-O-äthyl-
äther nicht erhalten wurde. Vermutlich behindert
eine in 12- oder 13-Stellung bereits vorhandene
Äthergruppierung die Verätherung der zweiten Hy-
droxylgruppe aus sterischen Gründen. Ein ähnlicher
Effekt scheint auch bei der Acetylierung von Phor-
bol-12-äthyläther (11) mit Acetanhydrid/Pyridin
vorzuliegen: Phorbol-12-acetat wird in 4 — 6 Stdn.,
Phorbol-12-äthyläther (11) unter gleichen Bedin-
gungen aber erst in ca. 50 Stdn. acetyliert.
17 ch. v. S zczep an ski, Dissertation, Univ. München 1965, a:
S . 20, b: S . 39/40, c : S . 61.
15 E. H e c k e r, H . K u b in y i, ch. v . S zcze p an sk i, E.
H ä r le u. H .
B re s c h , Tetrahedron Letters [London] 1965, 1837.
18 H . v. E u le r u . B. E is t e r t, Chemie und Biochemie der Re-
duktone und Reduktonate, F. Enke Verlag, Stuttgart 1957,
dort S. 20.
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Trityläther (vgl. Tab. 3): Vorschriften zur Darstel-
lung sind bereits a. 0 . 12 angegeben.
Die Trityläther färben sich auf der Dünnschicht-
platte nach Ansprühen mit V/S charakteristisch gelb
an.
Die Oxydierbarkeit tertiärer Cyclopropanole mit
F e h l i n g scher Lösung und T o l l e s ’ Reagenz war
bis vor kurzem ebenso unbekannt wie die besondere
Reaktivität dieser Hydroxylgruppe, die sich auch in
Veresterungs- und Umesterungsversuchen11 zu er-
kennen gibt. Die letztere Eigenschaft hat uns schon
frühn *17a’b veranlaßt, für Phorbol ein „quasi
enolisdies“ Strukturelement zu postulieren, das wir
auf Grund der KMR-Daten18 und einer Umlage-
rung 17b als tertiäre Cyclopropanolgruppierung an-
sprachen 15 (vgl. 1 . c. 3’4’ 11).
In der Elektronenstoß-Massenspektrometrie lassen
sich meist nur die um das Triphenylmethylradikal ver-
minderten Fragmentionen nachweisen. — Im KMR-
Spektrum erscheinen die 15 aromatischen Protonen des
Triphenylmethylrests als komplexe Signale bei 7,2 bis
7.5 ppm. Durch die Tritylierung der primären allyli-
schen Hydroxylgruppe wird das Singulett der Proto-
nen Hä-2 0 um etwa 0,4 ppm zu höherem Feld nach
3.6 mmp verschoben. — Im UV-Spektrum der Phor-
bol-2 0 -trityläther-Derivate erscheint die Bande des
n—jr*-Ubergangs der a,^-ungesättigten Carbonyl-
gruppe bei 328 —332 nm. Die Extinktion entspricht der
von Phorbol-Derivaten mit aliphatischen Äther- und
Estergruppen (e = 80—107). Das Maximum der
71—Ji*-Bande des Enonsystems verschwindet unter der
starken Absorption des Triphenylmethylrests; es tre-
ten zwei Schultern bei 257—259 nm (e 3900—4100)
und 252—253 nm (f 4100 —4500) auf. Im Tief-UV
liegt (bei zwei vermessenen Substanzen) ein Maximum
bei 196—197 nm mit einer Extinktion von 80 000 bis
90 000.
Vor der Darstellung des instabilen Cyclopropanols 19
waren bereits einzelne tertiäre Cyclopropanole (Apo-
tricyclol 20,
1-Hydroxy-l-carboxycyclo-propan21
be-
schrieben und näher untersucht worden. Allgemeine
Darstellungsweisen für einfache, sekundäre und ter-
tiäre Cyclopropanole sind erst seit etwa 1964 bekannt
(vgl. z.B. I.e. 22-24). Die besondere Reaktivität ter-
tiärer Cyclopropanhydroxyle bei Acetylierung und
Oxydation blieb jedoch bis zu den am Phorbol erhobe-
nen Befunden3>4’ 1 5 , 1 7 , 18 unerkannt. schaafsm a, stein -
ber G und de b oer 25 haben später unabhängig von uns
auf die Oxydierbarkeit einfacher tertiärer Cyclopro-
panole hingewiesen.
Auf Grund der vorliegenden Befunde steht nun-
12.13-Di-0-acetyl-phorbol-20-methyläther (5) mit
Diazomethan: Durch Umsetzung von Phorbol-12.13-di-
acetat mit Diazomethan in Gegenwart von Al-i-propylat
konnte nach 6 Stdn. in 70-proz. Ausbeute das an der
primären Hydroxylgruppe methylierte Produkt erhal-
ten werden. Nach der für (6 ) beschriebenen Aufarbei-
tung wird an Si02 nach dem System Ä/PÄ = 3/l chro-
matographiert. Schmp. 196—198 °C.
mehr fest, daß — wie bereits vermutetn
’ 1 5 , 1 7 , 18 —
in Partialstruktur 2 eine tertiäre Hydroxylgruppe
am Dreiring steht: Phorbol ist unseres Wissens das
erste Cyclopropanol-Derivat *, das als Naturstoff
vorkommt.
•R/-Wert in CH2C12/A = 8/2 : 0,35, Anfärbung mit
V/S: braun.
Beschreibung der Versuche
Allgemeines: vgl. I.e.
1
[ot]s46 =67°; [a]” =65° (1%, Dioxan).
Soweit nicht die chemischen Symbole selbst kurz
sind (z. B. CC74 , CHCls, CH2Cl2), werden häufig ver-
wendete Lösungsmittel bzw. Reagenzien wie folgt ab-
gekürzt: Aceton (A), Äther (Ä), Benzol (B), Cyclo-
hexan (Cyclo), Di-isopropyläther (DiPÄ), Essigester
(EE), Kaliumbromid (KBr), Petroläther (PÄ), Tetra-
hydrofuran (THF) ; Vanillin/Schwefelsäure (V/S).
Diazomethan wird in üblicher Weise aus Nitroso-
methylharnstoff, Diazoäthan27 aus O-Äthyl-A^-nitroso-
N-äthyl-carbamat dargestellt. Kieselgel (Si02) ist mit
13% Wasser desaktiviert.
^•2 5 ^ 3 4 0 3 (462,3)
Ber. C 65,00
Gef. C 65,09
H 7,35,
H 7,28.
MS: Molekülion m/e = 462.
KMR (CDCI3) : H-12 5,42 (D); H2-20 3,8 (S) ; OCHs
3,29; zwei OCOCH3 2,05; zwei OH (aus-
tauschbar) 5,46 und 2,58 ppm.
IR (KBr) : vo-h 3390; v0 ch3 2815; v€ = 0 1740, 1720,
1690; vc=c 1625cm“ 1.
UV (Methanol): Amax 232, 330 nm; £ 4850, 90.
* Die für den Sexuallockstoff der amerikanischen Küchen-
schabe (Periplaneta americana L.) vorgeschlagene Struktur
eines Propionsäureesters des 2.2-Di-methyl-3-isopropyliden-
cyclopropanols konnte nicht bestätigt werden (vgl. 1. c. 26).
18 H. B re s c h , Dissertation, Univ. München 1964.
19 J. K. M a g r a n e u. D. L. C o t t le , J. Amer. chem. Soc. 64, 484
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[1921] ; P . L ip p , J. B u c h k re m e r u. H. S e e le s , Liebigs Ann.
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24 U. S c h ö llk o p f, Angew. Chem. 80, 603 [1968] ; Angew.
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25 S . E . S c h a a fs m a , H. S te in b e rg u . T h . J. d e B o e r, Recueil
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20-Trityläther von11
Phorbol-Derivaten
Schmp.
[°C]
Zur massenspektrometrischen Identifi-
zierung verwendete Derivate *
Molekül-
ion m/e
12-0 -Äthyl-phorbol-20-trityläther
12-0-Äthy]-phorbol-13-acetat-20-trityläther
Harz
Harz
476
602
12-0-Äthyl-phorbol-13, 20-diacetat
12-0-Äthyl-photbol-13-tetradecanoat
12-0-Äthyl-phorbol-13-tetradecanoat-20-
trityläther
Harz
12-0-Tetradecanoyl-phorbol-20-trityl-äther12
12-0-Tetradecanoyl—phorbol-13-acetat-
20-trityläther12
Harz
Harz
616
602
12-O-Tetradecanoyl-phorbol-
13-acetat (Ai)12
13-0-Äthyl-phorbol-20-trityläther
12-0-Tetradecanoyl-phorbol-13-äthyläther-
20-trityläther
128-130
Harz
12-O-Tetradecanoyl-phorbol-
13-äthyläther
Tab. 3. 20-Trityläther von Phorbol-Derivaten und ihre massenspektrometrische Charakterisierung (vgl. dazu auch 1. c.12).
* der Tritylrest wurde auf chemischem Wege abgespalten.
12.13.Di-0-acetyl-phorbol-20-methyläther (5) mit
CHsJ/Ag20/Essigester: Man löst 300 mg Phorbol-12.
13-diacetat in 14ml Essigester und fügt 140 mg AgäO
und 0,15 ml CH3J hinzu. Die Luft wird durch N2 ver-
drängt. Nach 100-stdg. Schütteln hat sich ungefähr die
Hälfte umgesetzt. Man zentrifugiert und wäscht den
Bodenkörper noch 2-mal mit je 5ml Essigester. Die
Essigesterlösung wird eingedampft und chromatogra-
phiert. Neben 148 mg nicht umgesetztem Phorbol-12.
13-diacetat (50%) werden 133 mg 12.13-Di-O-acetyl-
phorbol-2 0 -methyläther (Schmp. 196—198 °C) isoliert.
drei OCOCH3 2,2 (S), 2,12 (S), 2,01 (S); ein OH
(austauschbar) 3,23 ppm.
IR (CCI4) : ro-H 3570, 3450; T0 CH3 2820; vc= 0
1735, 1705; vc=c, konj. 1625 cm-1.
UV (Cyclo) : Amax234 nm;
e 5800.
Versuch zur Peracetylierung: Man löst 300 mg (6 ) in
15 ml Acetanhydrid und fügt 300 mg p-Toluolsulfon-
säure hinzu. Nach drei Tagen hat sich das Ausgangs-
produkt quantitativ in eine Substanz mit einem etwas
kleineren ify-Wert umgesetzt. Nach der üblichen Auf-
arbeitung reinigt man das Rohprodukt durch Dick-
schichtdiromatographie im System Ä/PÄ = 4/l, Aus-
beute 74% d. Th., IR- ,UV- und KMR-Spektren des
Reaktionsprodukts sind mit denen von Phorbol-penta-
Die spektralen Daten (IR, KMR) sowie der Misch-
schmelzpunkt zeigen, daß das Reaktionsprodukt mit
(5) identisch ist.
9.12.13-Tri-0-acetyl-phorbol-20-methyläther (6 ): Man acetat identisch.
löst 600 mg Phorbol-9.12.13-triacetat in 50 ml abs. Di-
Phorbol-13.20-dimethyläther (7) : Man löst 3 g
äthyläther und fügt 600 mg fein gepulvertes Al-i-pro-
pylat hinzu. Während diese Suspension möglichst lang-
sam gerührt wird, tropft man eine ätherische Lösung
von Diazomethan hinzu. Der Reaktionsverlauf wird
dünnschichtchromatographisch überprüft. Nach etwa
6 Stdn. entfärbt sich die Diazomethan-Lösung kaum
mehr. Es ist zweckmäßig, die Reaktion abzubrechen,
bevor alles Ausgangsmaterial verbraucht ist. Bei zu
langer Reaktionsdauer entstehen in geringer Menge
schwer abtrennbare Nebenprodukte. Die Aufarbeitung
des Ansatzes gilt entsprechend für alle Verätherungen
dieses Typs. Man schüttelt das Reaktionsgemisch 3-mal
mit 20 ml 1-n. Weinsäurelösung aus, bringt die ver-
einigten Weinsäureauszüge mit 2-n. Ammoniak auf pH
8 und schüttelt sie noch 3-mal mit je 30 ml Diäthyl-
äther aus. Die organischen Phasen werden vereinigt
und mit 50 ml Wasser gewaschen. Man trocknet über
Magnesiumsulfat und destilliert das Lösungsmittel am
Rotationsverdampfer ab. Nach Säulenchromatographie
an 200 g Kieselgel mit dem System PÄ/Ä = 2/l erhält
man 480 mg harzigen 9.12.13-Tri-0-acetyl-phorbol-20-
methyläther.
Phorbol in 150 ml Tetrahydrofuran abs. und fügt 6 g
feingepulvertes Al-i-propylat hinzu. Während das Reak-
tionsgemisch möglichst langsam gerührt wird, tropft
man während 6 Stdn. eine ätherische Lösung von Di-
azomethan zu, bis die gelbe Farbe des Diazomethans
nicht mehr verschwindet. Auf dem Dünnschichtchroma-
togramm sieht man neben mehreren Zersetzungspro-
dukten einen intensiveren Substanzfleck. Dieses Haupt-
produkt wird nach der üblichen Aufarbeitung säulen-
chromatographisch abgetrennt (Säule 120-4; 400 g
Kieselgel; eluiert wird mit Ä/PÄ = 4/l). Man erhält
1,35 g (42% d. Th.) chromatographisch reinen Phor-
bol-13.20-dimethyläther. Gegenüber Fe hl i n g scher
Lösung und T o11en s Reagenz zeigt die Verbindung
keine Reaktion. Rf-Wert in CH2Cl2/A= 3/2 : 0,51. An-
färbung mit V/S: rotbraun, [a] 5« = 8 6 °; [a] s?8 =
80° (1%, Dioxan).
MS: Molekülion m/e= 392.
KMR (CDCI3) : H-12 4,12 (D); zwei OCH3 3,41
(S), 3,29; H2-20 3,78 (S); drei OH (austauschbar)
3,2—1,8 ppm.
i?f-Wert in Ä/PÄ = 4/l : 0,5, Anfärbung mit V/S:
braun. [a]L5, = 77°; [a] S .-74° (1 %, Dioxan).
MS: Molekülion m/e= 504.
IR (KBr) : vo-H 3430; vochj 2820; vo= 0 1695;
rc=c 1625 cm-1.
KMR (CDC13) : H2-20 3,90 (S); OCH3 3,36 (S);
UV (Methanol): Amax 231 —233 nm; e 5050.
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Verätherungsversuch von Phorbol-20-trityläther mit
12-0-Äthyl-phorbol-20-trityläther (9) : i?/-Wert in
Diazomethan: Man löst 20 mg Phorbol-20-trityläther B/EE = l/l: 0,54. Anfärbung mit V/S: gelbbraun.
in 10 ml abs. Diäthyläther. Zusammen mit 10 mg fein- Die Verbindung reduziert F ehl i ng sehe Lösung und
gepulvertem Al-i-propylat rührt man die Suspension T o11en s Reagenz.
langsam und tropft ätherische Diazomethanlösung zu.
Im Gegensatz zur analogen Reaktion mit Diazo-
KMR (CDC13) : Komplexes Signal bei 7,1—7,5;
H-12 3,6 (D); H2-20 3,56 (S); Äthyläther: OCH2
äthan (vgl. unten) tritt auf der Dünnschichtplatte im 3,6 (M) ; H3 1,2; OH (austauschbar) 2,6—3,3 (3)
wesentlichen nur ein Substanzfleck (wahrscheinlich ppm.
13-0-Methyl-phorbol-20-trityläther) auf. Nach 12 Stdn.
ist der größte Teil des Ausgangsprodukts verbraucht,
IR (CH2C12) : Im Vergleich zu 13-0-Äthyl-phorbol-
20-trityläther nur geringfügige Unterschiede im Gebiet
und es treten zusätzliche verschmierte Substanzflecken der OH-Valenzschwingungen.
auf. UV (Methanol) : Identisch mit dem von 13-0-Äthyl-
phorbol-2 0 -trityläther.
7?/-Wert des Hauptprodukts in B/EE = l/l : 0 ,2 1 .
Anfärbung mit V/S: gelbbraun.
Bisdehydrophorbol-12.20-diacetat (10) : Man löst
500 mg Phorbol-12.20-diacetat in 22 ml Essigester und
fügt 2 0 0 mg Ag20 und 0,25 ml Methyljodid hinzu. Die
Luft wird durch N2 verdrängt. Nach 13-stdg. Schütteln
hat sich das Ausgangsprodukt praktisch quantitativ in
eine Verbindung kleineren Rf-Werts umgewandelt.
Man zentrifugiert vom Bodenansatz ab (2-mal Waschen
mit 5ml Essigester) und dampft die Lösung ein. Chro-
matographiert wird an 200 g Si02, nicht desaktiviert,
mit B/EE = 5/4 als Elutionsmittel. Man erhält 380
mg (10). Schmp. 186—189 °C. Rf-Wert in EE: 0,7. An-
färbung mit V/S: grünschwarz.
Rf-Wert von 12-0-Äthyl-phorbol-20-trithyläther im
gleichen System: 0,3.
Umsetzung von Phorbol-20-trityläther mit Diazo-
äthan: Zu einer Lösung von 14 g Phorbol-20-trityläther
(23 mMol) in 500 ml trockenem Äther fügt man 6 g
feingepulvertes Aluminium-i-propylat hinzu. Unter
möglichst langsamem Rühren tropft man während
6 Stdn. eine ätherische Lösung von Diazoäthan hinzu,
bis die orangegelbe Färbung des Diazoäthans nicht
mehr verschwindet. (Erfahrungsgemäß braucht man
etwa 200 mMol Diazoäthan dazu. Der Gehalt an Di-
azoäthan wird bestimmt, indem man zu einem Aliquot
Diazoalkanlösung Benzoesäure bekannter Konzentra-
tion im Überschuß hinzufügt und dann die unveresterte
C24H30O6 (446,5)
Ber. C 64,57 H 6,72 O 28,71,
Gef. C 64,51 H 6,67 O 28,82.
MS: Molekülion m/e = 446.
Benzoesäure mit
n/10 NaOH auf dem Umschlagspunkt
UV (Methanol) : Amax246 nm;
IR (KBr) : ^o-H 3460; vc=o 1715, 1700; vc=c 1640,
1620 cm“1.
KMR (d5-Pyridin) : kein OCH3 Signal; H2-17 5,1 und
4,81; H3-18 1,9-1,8; H3-16 1,6 (D) ppm.
e 5340.
von Phenolphthalein zurücktitriert.) Man arbeitet den
Reaktionansatz in üblicher Weise auf: Nach Säulen-
chromatographie (Säule: 160-6 cm, 1000 g Si02;
eluiert wird mit B/EE = 10/l, 10/3, 10/5 und l/l) wer-
den 2,8 g 12-0-Äthyl-phorbol-2O-trityläther (9) (19% d.
Th.) und 7,6 g 13-0-Äthyl-phorbol-2O-trityläther (8 )
(52% d. Th.) erhalten.
Oxydation von Phorbol-12.20-diacetat mit Pb02:
Man löst 600 mg Phorbol-12.20-diacetat in 50 ml Es-
sigester (abs.) und fügt 500 mg frisches, durch Hydro-
lyse von Bleitetraacetat hergestelltes Bleidioxid 28 hin-
zu. Nach 2 Stdn. wird das Pb02 abzentrifugiert; das
Lösungsmittel destilliert man ab. Verwendet man käuf-
liches Bleidioxid für diese Reaktion, so ist die Um-
setzung nach 24 Stdn. noch nicht beendet. Nach dick-
schichtchromatographischer Reinigung (System B/EE
= l/l) erhält man 180 mg Bisdehydrophorbol-12.20-di-
acetat (10) Rf-Wert in B/EE = l/l : 0,37), wie man
aus Mischschmelzpunkt und den spektrometrischen
Daten ersieht (30% Ausbeute). Weiter wurden 60 mg
einer Verbindung mit einem 7?/-Wert von 0,43 (System
B/EE = l/l) und 200 mg einer Substanz mit dem Rf-
Wert 0 ,2 als Harze isoliert.
13-0-Athyl-phorbol-20-trityläther (8 ): Schmelzpunkt:
128-130 °C. fl,-Wert in B/EE = l/l : 0,3. Anfär-
bung mit V/S: gelbbraun. Die Verbindung zeigt keine
Reaktion mit F eh 1i n g scher Lösung und T o11en s
Reagenz.
[a] Me = 74°; [a] E. = 71° (1%, Dioxan).
C41H4606 (634,8)
Ber. C 77,57
Gef. C 76,82
H 7,30,
H 7,32.
KMR (A-100 in CDC13) : 15 aromatische Protonen und
H-l als komplexes Signal bei 7,5—7,1;
H-12 4,13 (D) ; H2-20 3,56 (S) ; Protonen
des Äthyläthers OCH2 3,52 (M); H3 1 , 2 (T).
Drei OH (austauschbar) 3,5, 2,9, 1,95 ppm.
Phorbol-12-äthyläther (11): Man erhitzt 80 ml Eis-
essig im Wasserbad auf etwa 95 °C und schüttet 1,2 g
verschäumten 1 2 -0 -Äthyl-phorbol-2 0 -trityläther dazu.
Die Luft wird durch N2 verdrängt. Nach 10 Min. rotiert
man den Eisessig im Hochvakuum weitgehend ab und
löst den Rückstand in 100 ml Essigester. Man schüttelt
die organische Phase mit KHC03-Lösung bis keine
saure Reaktion mehr feststellbar ist, und wäscht mit
Wasser nach. Nach dem Abdestillieren des Lösungsmit-
IR (CH2C12) : vo—H 3430; vc=o 1700; rc=c 1620 und
1595; rc-c arom. 1587, 1482, 1440;
VC-Harom. 3100—3000 Cm-1.
UV (Methanol) : Amax 195, 329 nm; £ 70000, 101.
28 G. B r a u e r , Handbuch der präparativen anorg. Chemie, F.
Enke, Stuttgart 1960, S. 672.
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KMR (CDC13) : H2-20 4,49 (S); H-12 3,98 (D);
OCH3 3,25 (S) ; H2-52,45 (AB-System); zwei OCOCH3
2,13 (S), 2,07; OH (austauschbar) 3,2, 3,0—2,6 ppm.
IR (KBr): ro-H 3420; voCHs 2815; vc=o 1720,
1700; vc=c 1628 cm-1.
tels reinigt man das Rohprodukt durch Säulenchro-
matographie (Säule 140-3,5 cm; 400 g Si02). Man
eluiert mit CH2C12/Ä = 7/3 und Ä/M = 20/1. Man
erhält 600 mg (70% d. Th.) chromatographisch reinen
Phorbol-12-äthyläther.
UV (Cyclo) : Araax 193, 248, 338 nm; £ 12920, 5020,
88.
i?/-Wert in CH2C12/A = l/l : 0,51. Anfärbung mit
V/S: rotbraun, [a] U. = 25°; [a] 5, = 23° (1%,
Dioxan).
IR (KBr): vo—H 3420; vc=o 1700; rc=C 1625
cm-1.
UV (Methanol) : Amax 194, 230 nm; £ 12000, 5400.
Zur weiteren Charakterisierung wird dieses 4-O-Me-
thyl-phorbol-13.20-diacetat mit Acetanhydrid/Pyridin
verestert.
4-O-Methyl-phorbol-12.13.20-triacetat (14) : Man
löst 200 mg 4-0-Methyl-phorbol-13.20-diacetat in 8 ml
Pyridin und fügt 1,5 ml Acetanhydrid hinzu. Nach 24
Stdn. wird der Ansatz wie üblich aufgearbeitet und
durch Dickschichtchromatographie gereinigt (System
B/EE = 3/1). Ausbeute: 180 mg (92% d. Th.). Rf-
Wert in B/EE = 3/2 : 0,52. Anfärbung mit V/S:
braun, [a]”» = 85°; [a]57s = 73° (1%, Dioxan).
12-O-Äthyl-phorbol-l3.20-diacetat (12) : Man löst
500 mg Phorbol-12-äthyläther in 10 ml Pyridin abs.
und fügt 3 ml Acetanhydrid hinzu. Die Reaktion kann
erst nach 50 Stdn. abgebrochen werden. Nach der
üblichen Aufarbeitung reinigt man das Rohprodukt
durch Didcschichtdiromatographie im System PÄ/Ä =
1/2. Man erhält 450 mg chromatographisch reines
12-O-Äthyl-phorbol-l2.20-diacetat. Nach Umlösen aus
PÄ/Ä gewinnt man ein kristallines Produkt (76%
MS: Molekülion m/e = 504.
KMR (CDC13) : H-l 7,42 (S); H-12 5,39 (D);
H2-20 4,46 (S); OCH3 3,25 (S); H2-5 2,45 (AB-Sy-
stem) ; drei OCOCH3 2,06 (S), 2,04, 2,02; OH (aus-
tauschbar) 5,2 ppm.
IR (CCI4) : ro-H 3420; voCHs 2822; vc=o 1735,
1722, 1700; rc=c 1625 cm“ 1.
d. Th.). Schmp. 189-191 °C. Rf-Wert in PÄ/Ä =
1/2 : 0,27. Anfärbung mit V/S: braun, [a]^« = 27°;
[a]s78 = 25° (1%, Dioxan).
C26H3608 (476,6)
UV (Methanol) : Amax 248, 338 nm; £ 4420, 91.
CD (0,1%, Dioxan) : Vorzeichenumkehr gegenüber
Phorbol-12.13.20-triacetat: 280 nm (—0,48); 295 nm
(—0,04); 320 nm (—0,16); 340 nm (0); 350 i nm
(0,08); 359 nm (+0,26); 372 i nm (+0,22); 395 nm
(0).
Ber. C 65,60
Gef. C 65,07
H 7,62,
H 7,77.
MS: Molekülion m/e = 476.
KMR (A 100 in CDC13) : Entkopplungsspektrum; H-l
7,58; H-7 5,68; H2-20 4,44; H-12 3,60;
Äthyläther-Protonen CH2 3,6; CH3 1,24;
H-8 3,20; H-10 3,20; H2-5 2,45; zwei
OCOCH, 2,28 und 2,12; H-ll 1,95; H3-19
1,78; Hs-16, 17 1,28 und 1,02; H-14 1,02;
zwei OH (austauschbar) 5,52 und 2,58 ppm.
4-O-Methyl-phorbol-12.13.20-triacetat (15) : Man
löst 970 mg Phorbol-12.13.20-triacetat in 7,5 ml Di-
methylformamid und fügt 750 mg käufliches Ag20 und
0,5 ml Methyljodid hinzu. Wenn die Luft im Kolben
durch Stickstoff verdängt ist, wird die Suspension ge-
rührt. Man bricht die Reaktion ab, bevor alles Aus-
gangsprodukt verbraucht ist, da sonst zu viele Neben-
4-O-Methyl-phorbol-13.20-diacetat (13) : 600 mg
Phorbol-13.20-diacetat werden in 5ml Dimethylform-
amid gelöst, mit 500 mg Silberoxid sowie 500 mg Me-
thyljodid versetzt und 15 Stdn. bei Zimmertemperatur
gerührt. Man wartet nicht, bis alles Phorbol-13.20-di-
acetat umgesetzt ist, da sonst die Nebenprodukte über-
hand nehmen. Die Suspension wird zentrifugiert, den
Bodenkörper wäscht man zweimal mit je 15ml Chloro-
form. Die vereinigten Lösungen versetzt man mit 40 ml
einer 10-proz. KCN-Lösung und schüttelt viermal mit
je 15 ml Cloroform aus. Die Chloroformauszüge wer-
den noch zweimal mit je 25 ml 1-n. HCl und mit Was-
ser ausgeschüttelt, mit Magnesiumsulfat getrocknet und
im Rotationsverdampfer zur Trockene gebracht. Das
Reaktionsgemisch wird an 300 g Si02 mit dem Lö-
sungsmittelsystem B/EE = 5/2 bis l/l (log. Gradient)
chromatographiert. Neben nicht umgesetztem Phorbol-
13.20-diacetat (15% d. Th.) und mehreren Nebenpro-
dukten lassen sich 256 mg 4-0-Methyl-phorbol-13.20-
diacetat isolieren (45% d. Th.).
produkte
entstehen
(dünnschichtchromatographisch
überprüfen — Reaktionszeit etwa 15 Stdn.). Neben
der an OH-4 methylierten Verbindung ist noch ein wei-
terer Substanzfleck mit größerem i?/-Wert nachweisbar.
Nach der vorangehend beschriebenen Methode arbei-
tet man den Ansatz auf. Das Hauptprodukt ist nach
den IR-, UV- und KMR-spektrometrischen Daten mit
(14) identisch.
4-O-Methyl-phorbol-12.13-diacetat (15) : 1 g 4-0-Me-
thyl-phorbol-12.13.20-triacetat wird in 150 ml Metha-
nol gelöst und mit 0,5 ml einer 60-proz. Perchlorsäure
versetzt. Nachdem man die Luft im Kolben durch
Stickstoff verdrängt hat, läßt man die Lösung bei Zim-
mertemperatur stehen. Auf Grund des Dünnschicht-
chromatogramms kann die Reaktion nach 17 Stdn. ab-
gebrochen werden. Man arbeitet den Reaktionsansatz
wie bei der Synthese von Phorbol-12.13-diacetat auf
und gewinnt nach der säulenchromatographischen Tren-
nung (300 g Si02; System: B/EE = 2/1 und B/EE =
l/l) 640 mg harziges 4-0-Methyl-phorbol-12.13-diace-
tat, das im System Ä/PÄ zur Kristallisation gebracht
werden kann.
fy-Wert in EE/B = l/l : 0,44. (Phorbol-12.13.20-
triacetat: 0,59.) Anfärbung in V/S: braun, [a]“« —
82°; [a]”, = 77° (1%, Dioxan).
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KMR (CDC13) : H-12 5,65 (D); Hr 20 4,49 (S);
zwei OCH3 3,33 (S), 3,26; H2-5 2,5 (AB-System);
zwei OCOCH3 2,08 (S); OH (austauschbar) 2,1 ppm.
IR (KBr): vo-H 3440; V0CH3 2820; rc=c 1730,
1700; vc=c 1625 cm"1.
ify-Wert in B/EE = l/l : 0,31. Anfärbung mit V/S:
braun. Schmp.: 187—189 °C.
[a]i;.= 78°; [o]” = 74° (1%, Dioxan).
^25^340^ (462,5)
Ber. C 64,91
Gef. C 64,84
H 7,40,
H 7,35.
UV (Methanol): Amax 249 nm;
ganz trocken).
e 3540 (evtl. nicht
MS: Molekülion m/e = 462 (relative Intensitäten
bezogen auf den größten Peak bei m/e = 310; ober-
halb m/e = 444 wurden Massenspitzen >3%, darun-
ter !>8 %berücksichtigt).
4.20-Di-0-methyl-phorbol-12.13-diacetat: Man setzt
300 mg (15) in 30 ml Diäthyläther mit 300 mg Al-
i-propylat/Diazomethan um. Nach 2 Stdn. kann die
Reaktion bereits abgebrochen werden. Man arbeitet
den Ansatz wie bei (6 ) auf. Nach Dickschichtchro-
matographie (System: Ä/CH2C12 = 1 /2 ) erhält man
220 mg 4.2O-Di-0-methyl-phorbol-12.13-diacetat als
chromatographisch einheitliches Harz. i?/-Wert in
Ä/CH2C12: 0,8.
m/e 462; 445; 444; 403; 402; 385; 384; 371;
4; 10; 15; 20; 25; 83;
/[%]
3;
8 ;
m/e 370; 352; 343; 342; 325; 324; 311; 310.
/[%] 30; 17; 24; 63; 12; 43; 37; 100.
KMR (CDClj): H- 1 2 5,4 (D); H2-2 0 4,0 (S);
OCH3 3,3; H2-5 2,55 (AB-System); zwei OCOCH3
2,1: OH (austauschbar) 5,4 und 2,85 ppm.
IR (CC14) : ro-H 3420; rocH3 2820; vc= 0 1740,
1725, 1704; rC=o 1625 cm“ 1.
KMR (CDC13) : H-l 7,51; H-7 5,69; H- 1 2 5,42
(D); H2-20 3,85 (S) ; zwei OCH3 3,33 (S) und 3,3
(S); H-8 und H-10 3,3-3,0 (M) ; H2-5 2,57 (AB-Sy-
stem); zwei OCOCH3 2,19 (S); H,-19 1,78 (Q);
H-16, 17 1,24 (S); H-14 1,08 (D); H-18 0,94; OH
(austauschbar) 5,36 ppm.
UV (Cyclo) : ^max 233, 248, 340 nm;
88.
e
4350, 4200,
IR (CH2C12) : vo-H 3410; V0 CH3 2820; rc=o 1730,
1718, 1695; rC=c 1625 cm“ 1.
4.13-Di-0-methyl-phorbol-12.20-diacetat (16) : Setzt
man nach der gleichen Vorschrift wie vorangehend be-
schrieben 1 g Phorbol-12.13.20-triacetat ein und ver-
längert die Reaktionszeit auf 44 Stdn., so erhält man
nach zweimaliger Chromatographie an 300 g Kieselgel
(System für die Gradienteneluierung B/EE = 6/2 bis
3/2) neben 4-0-Methyl-phorbol-12.13.20-triacetat und
vielen Nebenprodukten 290 mg 4.13-Di-O-methyl-phor-
bol-1 2 .2 0 -diacetat als chromatographisch einheitliches
Harz (28% d. Th.).
UV (Cyclo) : Amax 200, 238, 247, 343 nm;
4290, 4360, 75.
£ 11500,
D ie M essu ng von zahlreichen Spektren sowie an-
regende D iskussionen verdanken wir H errn D r. A.
M annschreck (KMR) und H errn D r. J. JochiMs (KMR,
D op p elreson an z), H eidelb erg, H errn D r. c h. W ünsche
(M s ), H eidelb erg, und H errn Dr. H . B udzikieW icz
( M s ) , B raunschw eig, sowie H errn D r. V. s cheitel
(c irculard ichroism us), H eidelb erg.
Rf-Wert in B/EE = 5/2 : 0,2. Anfärbung mit V/S:
braun, [a]”» = 80°; [a] 5*8 = 74° (1%, Dioxan).
MS: Molekülion m/e = 476.
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