Synthesis and conclusive proof for the structure of glucofrangulin A from Rhamnus frangula L

Full text of DOI:10.1515/znb-1969-1110

H. WAGNER UND H. P. HÖRHAMMER
1408
Synthese und endgültiger Strukturbeweis von Glucofrangulin A
aus Rhamnus frangtila L. *
H. W a g n e r und H. P. H ö rh a m m e r, jr .
Institut für Pharmazeutische Arzneimittellehre der Universität München
(Z. Naturforschg. 24 b, 1408— 1413 [1969] ; eingegangen am 1. Juli 1969)
Durch Umsetzung eines Gemisches von Frangulin
A und B bzw. reinem 1.6.8-Trihydroxy-3-
methyl-anthrachinon-6-O-a-L-rhamnosid (Frangulin A) mit a-Acetobromglucopyranose nach einer
modifizierten K o e n i g s - K n o r r -Methode wurde Glucofrangulin A erhalten und über das Ace-
tat identifiziert. Das synthetische Glucofrangulin-A-Acetat ist in jeder Hinsicht mit dem von
Se e b e c k und Schindler sowie Mühlemann aus natürlichem Glucofrangulin hergestellten Acetat
identisch. Durch NMR-Vergleich mit verschiedenen Anthrachinon-1- bzw. -8-glykosiden wird für das
Glucofrangulin A die endgültige Struktur eines 1.6.8-Trihydroxy-3-methyl-anthrachinon-6-0-a-L-
rhamnopyranosyl-8-0-/?-D-glucopyranosides bewiesen.
1. Bisherige Untersuchungen
sid eine Monobiosidstruktur vor, in der die Glucose
an Rhamnose gebunden sein sollte.
Das Glucofrangulin ist neben Frangulin der gly-
kosidische und pharmakologisch wirksamste Haupt-
bestandteil der Faulbaumrinde (Cortex Frangulae
von Rhamnus jrangula L., Rhamnaceae). Erste Un-
tersuchungen durch ca Sp a r iS und M ä d e r 1 sowie
br id e l und ch a r a u x 2 über dieses Anthrachinon-
glykosid in den Jahren 1925 und 1931 ergaben
als Hydrolysenprodukte 1.6.8-Trihydroxy-3-methyl-
anthrachinon (Emodin), Rhamnose und Glucose.
Seebeck und Sc h in d l e r 3 stellten das Glucofrangu-
lin-Acetat her und schlugen auf Grund des von ihnen
erhaltenen kristallinen Dinatriumsalzes und der spä-
ter von Sc h in d l e r 4 durchgeführten fermentativen
Abbauversuche mit Rhamnodiastase für das Glvko-
Aus einem Vergleich der unterschiedlichen Hydro-
lysegeschwindigkeit von Glucofrangulin mit der ver-
schiedener a- und ß-Hydroxy-anthrachinonglucosi-
de schloß Sc h in d l e r 4'5, daß der Zuckerrest in
/5-Stellung, d. h. an der C-6-Hydroxylgruppe des
Emodins haftet. Neue Aspekte brachten die Unter-
suchungen aus unserem Arbeitskreis6’ '. Bei der
Chromatographie eines glucofrangulinhaltigen Ex-
traktes an Polyamid zeigte sich nämlich, daß das bis-
her für einheitlich angesehene Glucofrangulin ein
Glykosidgemisch ist. Die beiden Glykoside, die wir
Glucofrangulin A und B ** nannten, lieferten bei
der Hydrolyse Emodin und jeweils 2 Zucker. Wäh-
rend die Glucose Bestandteil beider Glykoside ist,
konnte von uns die Rhamnose bisher nur als Hydro-
lyseprodukt von Glucofrangulin
nachgewiesen werden.
A mit Sicherheit
Nur von Glucofrangulin A war ein kristallines
Acetylprodukt zu erhalten 8. l o n g o , M e in a r d i und
k ö r t e 9, die fast gleichzeitig zu ähnlichen Ergebnis-
sen gekommen sind, vermuteten, daß sich die beiden
Glucofranguline biosynthetisch vom Emodin-rham-
G lucosyl-R ham nosyl
-
0
Abb. 1. Formelvorschlag für Glucofrangulin (I) nach
S c h in d l e r .
5 J. H. G a rd n e r, Th. F. M cDem m el u. C. J. W ie g an d , J.
Amer. chem. Soc. 57, 1074 [1935].
6 S. Im re, Dissertation, München 1962.
*
1. Mitteilung über Anthrachinone der Faulbaumrinde.
1 P. C a sp aris u . R. M ä d e r , Schweiz. Apotheker-Ztg. 63, 313
[1925].
7 L. H örham m er, H. W ag n er u . G. B ittn e r , Pharmaz. Ztg.
2 M. B r id e l u . C. C h a r a u x . C. R. hebd. Seances Acad. Sei.
192. 1269 [1931].
E. Seebeck u . O . S c h in d le r . Helv. chim. Acta 29. 317
[1946].
108 9,259 [1963],
8 L. H örham m er. G. B ittn e r u. H. P. H örham m er. Natur-
wissenschaften 13, 310 [1964],
3
9
R. L o ng o . G. M e in a rd i u. F. K ö rte . Arch. Pharmaz. 297,
248 [1964].
4
0 . Sc h in d l e r , Helv. chim. Acta 29. 411 [1946].
** Auf Polyamid-DC im System Methanol/Wasser (3:1) hat
Glucofrangulin A den höheren Rf-Wert (fi/ = 0,40), Gluco-
frangulin (/?/= 0.30).
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SYNTHESE, STRUKTURBEWEIS VON GLUCOFRANGULIN
A
1409
nosid (Frangulin) ableiten, denn auch dieses erwies
sich chromatographisch und auf Grund der von uns
später durchgeführten Isolierungsarbeiten als ein
Gemisch (Frangulin A und B)8. Nach den Methylie-
rungs- und Enzymhydrolyse-Versuchen von LONGO
und Mitarbb. 9 soll ein Gemisch von 1.8-Dihydroxy-
3-methyl-anthrachinon-6-mono-a- und -/?-rhamnosid
vorliegen. Wir haben durch Verknüpfung von Emo-
din mit a-Acetobromrhamnose10, Entacetylierung
und durch Polyamidchromatographie isoliert hatten.
Wir glucosidierten nach der Methode von M ü h l e -
M a n n lo in Pyridin mit Silberoxid und Magnesium-
sulfat als Katalysatoren. Da eine Reindarstellung des
Kupplungsproduktes wenig Aussicht auf Erfolg hatte,
befreiten wir das Reaktionsgemisch von den Silber-
salzen und dem Pyridin, nahmen in Methanol auf
und verseiften mit 20-proz. Natronlauge. Das Chro-
matogramm zeigte Glucofrangulin
A und Gluco-
und Abtrennung des Hauptglykosides von Neben- frangulin
B
und daneben einen dritten Fleck in
schwacher Konzentration.
glykosiden eine Verbindung erhalten, die mit dem
von uns isolierten Frangulin A, dem a-Isomerglyko-
sid, identisch ist. Kürzlich haben nun M ü h l e M a n n
und W e r n l i 11 die bisher gültige Ansicht, Gluco-
frangulin sei ein Monobiosid, widerlegt. Die Auto-
ren stellten aus einem durch Kieselgel-Chromato-
graphie erhaltenen Glucofrangulin-Acetat12 — nach
unseren Untersuchungen das Glucofrangulin A-Ace-
tat — Octamethylglucofrangulin her und erhielten
nach saurer Hydrolyse nur ein 1- oder 8-Mono-
methyl-Emodin sowie 2.3.4.6-Tetramethylglucose
und Trimethylrhamnose. Nach der Monobiosidstruk-
tur von Se e b ec k und Sc h in d l e r 3 wäre zwar eine
Tetramethylglucose, aber keine Tri-, sondern eine
Dimethylrhamnose zu erwarten gewesen. Damit
stand fest, daß Glucofrangulin ein Diglykosid ist, in
dem die Rhamnose a-glykosidisch am C-6-Hydroxyl
gebunden ist und die Glucose in /5-glykosidischer
Bindung entweder am Hydroxyl 1 oder 8 des Emo-
dins haftet.
Abb. 2. Diinnschichtchromatographie der Produkte der Gluco-
frangulin A-Synthese. Adsorbens: Polyamid; System: Metha-
nol/Wasser (3:1). 1. A = Glucofrangulin A, B = Glucofran-
gulin B (isoliert) ; 2. A = Glucofrangulin A, B = Glucofran-
gulin B (synthetisiert) ; 3. A
= Frangulin A, B = Frangu-
lin B.
Zur Trennung des Glykosidgemisches chromato-
graphierten wir an einer Polyamid-Säule mit Was-
ser, 20-proz. und 40-proz. Methanol als Lösungs-
mittel. Die Auftrennung der Glykoside in 2 Zonen
ließ sich gut unter dem UV-Licht verfolgen. Es wur-
den Eluate gewonnen, die nur aus reinem Gluco-
frangulin A und B bestanden. Da die Glucofrangu-
line bisher weder nach Angaben anderer Autoren
noch nach eigenen Erfahrungen kristallisierbar sind
und keine definierten Schmelzpunkte liefern, acety-
lierten wir das aus der Säule eluierte Glucofrangu-
lin A mit Essigsäureanhydrid und Pyridin. Wir er-
hielten weißgelbe, nadelförmige Kristalle, die bei
228 —230° schmolzen. Die Acetylierung von Gluco-
frangulin B lieferte dagegen nur ein amorphes Pro-
dukt, das keinen definierten Schmelzpunkt aufwies.
Da nach unseren Erfahrungen bei Glykosidsyn-
thesen in der Anthrachinonreihe6’13 bei besetztem
C-6-Hydroxyl von den noch freien 1.8-Hydroxylen
bevorzugt nur eine der beiden glykosidiert wird,
war anzunehmen, daß die Umsetzung eines Frangu-
lin AB-Gemisches oder des Frangulins A mit a-Aceto-
bromglucose direkt zu den Glucofrangulinen A und
B bzw. zum Glucofrangulin A führt.
2. Synthese von Glucofrangulin A und Darstellung
von Glucofrangulin A-Acetat
Zur Glucosidierung verwendeten wir zunächst
chromatographisch reines Frangulin AB-Gemisch,
das wir in Anlehnung an br id e l und ch a r a u x 14
10 h .
W a g n e r u . h . P. h ö r h a M M e r , Naturwissenschaften
13 L. h ö r h a M M e r , L. F a r k a S , h .
W a g n e r u. S. i M r e , Acta
22, 285 [1966].
11 H. M ü h l e M a n n u . R.
40, 534 [1965].
chim. Acad. Sei. hung. 40, 309 [1964].
14 M . b r id e l u . C. c h a r a u x , C. R. hebd. Seances Acad. Sei.
W
e r n l i, Pharmac. Acta Helvetiae
191, 1151 [1964],
12 H. M ü h le m a n n u . H. S c h m id , Pharmac. Acta Helvetiae
15 H. M ü h l e M a n n , Pharmac. Acta Helvetiae 24, 315 [1949].
30, 363 [1955],
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H. WAGNER UND H. P. HÖRHAMMER
1410
In einem zweiten Versuchsansatz setzten wir reines
Frangulin A in der oben beschriebenen Weise um.
Das Kupplungsprodukt wurde nach Entfernen der
Silbersalze und des Pyridins direkt mit Essigsäure-
anhydrid und Pyridin zum Glucofrangulin A-Acetat
umgesetzt. Eine Reinigung des Acetylproduktes er-
folgte über eine Kieselgel-Säule mit Chloroform/
Methanol (99:1) als Elutionsmittel.
den Spektren von Anthrachinon-1- und -8-glykosiden.
daß die Glucose im Glucofrangulin A in 8-Stellung
glucosidiert ist.
Im einzelnen lassen sich folgende Zuordnungen
treffen: Im Bereich von (5= 7,0 —8,0 erscheinen die
Protonen des Anthrachinongerüstes. Das breite Si-
gnal bei niedrigem Feld ($ = 7,98) ist dem H-4, das
Dublett bei $ = 7,74 (/meta= 2,5 cps) dem H-5-Pro-
ton zuzuordnen. Zwei dicht beieinander liegende
Dublette stammen von den übrigen Protonen an C2
und C7 ($ = 7,21; $ = 7,17). Die Integration liefert
erwartungsgemäß 4 Protonen. Im Bereich von $ =
3,70 —5,80 finden sich die Zuckerprotonen. Die sich
aus der Integration ergebenden 12 Protonen stim-
men genau auf 1Mol Glykosyl (7 Protonen) und
1 Mol Rhamnosyl (5 Protonen). Die CH3-Gruppen
liefern Signale in 3 verschiedenen Bereichen. Bei
niedrigstem Feld integrieren 2 Signale bei $ = 2,53
und 2,50 zu insgesamt 6 Protonen, entsprechend
einer Acetyl- und einer C-Methylgruppe. Die zwi-
schen $ = 2,3 und 2,0 auftretenden 3 Signale liefern
zusammen 21 Protonen, entsprechend den 7 Acetyl-
gruppen an den beiden Zuckerresten. Ein Dublett bei
$ = 1,24 (/meta= 6,5 cps) repräsentiert die 3 Proto-
nen der Methylpentose Rhamnose.
Das synthetische Glucofrangulin A-Acetat hatte
auf Kieselgel G Merck im System Benzol/Methanol
(9:1) den gleichen i?/-Wert wie das von uns aus iso-
liertem Glucofrangulin A dargestellte Acetylprodukt.
Die CH-Verbrennungswerte und die Acetylgruppen-
bestimmung stimmten gut mit den theoretischen Be-
rechnungen überein. Die Mischschmelzpunkte zeig-
ten keine Depression, die IR-Spektren waren dek-
kungsgleich.
Auch mit dem von M ü h l e M a n n * isolierten
Glucofrangulin-Acetat zeigte unser synthetisch ge-
wonnenes Acetat in allen Daten volle Übereinstim-
mung. Bei der von M ü h l e M a n n 12 isolierten und
zum Strukturbeweis verwendeten Verbindung hat
demnach das Glucofrangulin A-Acetat Vorgelegen.
Da M ü h l e M a n n immer von acetylierten Extrakten
ausgegangen war, ist das Glucofrangulin B wegen
seiner schweren Acetylierbarkeit schon zu Beginn
der Aufarbeitung abgetrennt worden.
Abgesehen davon, daß durch Synthese nur das
1- oder 8-Glucosid des Frangulins
A entstehen
konnte, beweist das NMR-Spektrum des Glucofran-
gulins A die getrennte Anknüpfung der beiden Zuk-
ker. Da 7 Zucker-Acetylgruppen und nur eine Acetyl-
gruppe an einem Aromaten gefunden wurden, muß
eines der beiden a-Hydroxyle mit einem Zucker be-
setzt sein. Bei Vorliegen einer Biosidstruktur hätten
3. Über die Verknüpfung des Glucoserestes
im Glucofrangulin A
Das bisher noch nicht aufgenommene NMR-Spek-
trum von Glucofrangulin A-Acetat (Abb. 4) beweist
die Bisglykosidstruktur und zeigt im Vergleich mit
7I00
30i00________
r y
♦000c
m
2500_________
2000
2000
1500 H00 1300 1200
1100
1000
900
1
800
650 625
1
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J
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2.5/x
3
4
5
5
6
7
6
9
10
11
12
13
14
15
16
Abb. 3. Überlagerungsspektrum des synth. und isol. Glucofrangulin A-Acetates.
*
Wir danken Herrn Prof. M ü h l e M a n n , Bern, für die freundliche Übersendung von Glucofrangulinacetat.
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SYNTHESE, STRUKTURBEWEIS VON GLUCOFRANGULIN
A
1411
w
3.0
4.0
5.0 P P M (r) 6.0
7.0
6j0
9.0
2.0
2.0
1.0
8.0
7.0
6.0
5.0 PPM (6) 4.0
3.0
Abb. 4. NMR-Spektrum des synthetischen Glucofrangulin A-Acetates.
die Signale für 2 Acetylgruppen am Anthradiinon-
sprechen, daß dagegen ein Glucosylrest in einem
Ring die zIac der o-Protonen etwas erhöht und die
kern und 6 Acetylgruppen für die beiden Zucker-
reste erscheinen müssen. Damit ist endgültig bewie- der p-Protonen stark erniedrigt. So konnten Steg-
sen, daß die Glucose im Glucofrangulin A an das
Cl- oder C8-Hydroxyl gebunden ist.
lich und löSel 19 ein aus Dermocybe sanguinea
isoliertes Emodinglucosid eindeutig als das 1-0-
Glucosid identifizieren.
Was die Stellung von Zuckerresten in Poly-
hydroxy-anthrachinon-glykosiden anlangt, so wurde
diese bisher nur durch Permethylierung, saure
Hydrolyse und Strukturaufklärung der Methylaglu-
cone 16~18 ermittelt. M ü h le m a n n 11 hatte zwar bei
der Permethylierung von Glucofrangulin ein Mono-
methylemodin erhalten, er konnte aber nicht klären,
ob es sich dabei um den 1- oder 8-Monomethyläther
des Emodins gehandelt hat.
Wendet man diese Regel auf das von uns syn-
thetisierte Glucofrangulin an (s. Tab. 1), so ergibt
sich eindeutig aus der Acylierungs-Verschiebung,
daß die Glucose an 8-0- gebunden sein muß.
Kürzlich konnten S te g lic h und L ö s e l 19 die
Stellung von O-Alkyl- und -Glykosyl-Substituenten
bei 1.8-Dihydroxy-anthrachinon-Derivaten durch
NMR-Untersuchungen festlegen. Sie verglichen die
chemische Verschiebung der beiden A- und C-Ring-
(C2—C4 und C5—C7)-Protonen in den peracetylier-
ten und pertrimethylsilylierten Verbindungen. Dabei
fanden sie z. B. bei den miteinander isomeren Emo-
din-1- bzw. -8-glucosiden, daß die Acylierungs-Ver-
schiebungen * der beiden Aromatenprotonen im nicht
glykosidierten Ring etwa denen des Aglykons ent-
-
0,45
-
0.56
Rj Rhamnopyran osyl
R2= Glucopyranosyl
Abb. 5.
-
16 A. C. b e l l a a r t u . C. k o n in g S b e r g e r , Recueil Trav. chim.
Pays-Bas 79, 285 [I960],
19 W. S t e g lic h u . W. L ö s e l, Tetrahedron [London], im
Druck.
17 A. C. b e l l a a r t , Pharmacol. Weekbl. 97, 105 [1963] ; A.
c. b e l l a a r t , C hem . Ber. 99, 2471 [1966].
* ^ ac = (5h arom. (Per-trimethylsilyl-aglykon) — 5h arom.
(Peracetylglykosid).
18 l. h ö r h a M M e r , l . F a r k a S , h . W a g n e r u . E. M ü l l e r ,
Chem. Ber. 97, 1662 [1964],
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H. WAGNER UND H. P. HÖRHAMMER
1412
sammen unter einer IR-Lampe getrocknet. Die Extrak-
Die Acylierungs-Verschiebung für die H-2- und
tion der Franguline mit Athylacetat in einem Sikko-
Topf nahm ca. 18 Stdn. in Anspruch. Wir dampften
den Extrakt im Vakuum zur Trockene ein und lösten
den Rückstand unter Erhitzen auf dem Dampfbad in
200 ml Methanol. Die noch heiße Lösung wurde mit
ca. 100 g Polyamidpulver (aus Ultramid B3-BASF
nach einem Spezialverfahren hergestellt, Korngröße
ca. 60 /.i)20 vermischt und getrocknet. Das trockene Pul-
ver streuten wir auf vier, mit Polyamidpulver, gefüllte
Säulen (Durchmesser 6 cm, Füllhöhe 45 cm) auf. Das
Perlonpulver wurde zuvor mit Methanol gewaschen und
in die Säulen eingeschlämmt. Nach dem Entwickeln
mit Methanol konnten wir im unteren Drittel der Säu-
len einige Zonen mit bläulicher, brauner und gelb-
brauner Fluoreszenz erkennen. Der mittlere Teil be-
stand aus einer gelben breiten Zone und im oberen
Drittel war ein rotbrauner Abschnitt zu sehen. Nach-
dem die unteren Zonen aus der Säule eluiert waren,
wurde die gelbe Zone in Fraktionen zu je 50 ml aufge-
fangen. Die chromatographische Überprüfung auf
Polyamidplatten (Laufmittel: Methanol) zeigte an, daß
die meisten der gesammelten Eluate aus Frangulin A
und Frangulin B bestanden. Sämtliche Mischfraktionen
wurden vereinigt und auf 20 ml eingedampft. Dieses
Konzentrat wurde an einer zweiten Polyamidsäule chro-
matographiert. Dabei konnten wir Fraktionen abfan-
gen, die zu etwa einem Viertel aus reinem Frangulin A,
zu zwei Viertel aus Frangulin AB-Gemisch und zu einem
weiteren Viertel aus Frangulin B bestanden.
H-4-Protonen stimmt gut mit der des pertrimethyl-
silylierten Emodins und Emodin-8-glucosides über-
ein. Die AAc des H-5-Protons ist gegenüber der des
persilylierten Emodins stark erniedrigt. Lediglich
für das H-7-Proton findet man nicht die erwartete
A
\Q-Erhöhung.
H-4(<5)
^AC
H-5(<5) H-7(<5)
H-2 («5)
A A C
A AC
A AC
7,74
7.17
Glucofrangulin A
(peracetyl.)
Emodin-8-glucosid
(peracetyl.)
Emodin-1-glucosid
(peracetyl.)
Emodin (pertri-
methylsilyl.)
7,21
7,98
-
-
-
-
0.41
7.23
0.43
7.35
0,55
6.80
0.44
-
0.45
7,97
0.44
7.88
0,35
7,53
0,50
-
-
-
-
0,56
7.76
0.58
7.96
0.79
7.18
0.80
-
-
-
-
0,71
7,31
0.85
7.29
0.83
6.76
0.80
-
-
Tab. 1. Vergleich der NMR-Spektren und Acylierungs-Ver-
schiebung von peracetyliertem Glucofrangulin A mit peracety-
lierten Emodin 1- und 8-glucosiden und pertrimethylsilylier-
tem Emodin.
Damit ist für das Glucofrangulin A die Struktur
eines 1.6.8-Trihydroxy-3-methyl-anthrachinon-6-0-a-
L-rhamnopyranosyl-8-0-/?-D-glucopyranosids bewie-
sen.
Die Mischfraktionen wurden zusammengefaßt und
sehr stark konzentriert. Nach etwa 12 Stdn. trat ein
orangefarbener Niederschlag auf, der chromatogra-
phisch überprüft wurde. Er bestand aus einem Fran-
gulin AB-Gemisch (Ausbeute 1,2 g).
HO
Die chromatographisch reinen Frangulin A-Fraktio-
nen wurden zur Trockene eingedampft und aus Metha-
nol p.A. umkristallisiert.
Frangulin A: Schmp. 228 (Ausbeute 608 mg).
C2ih20o9 (416.2)
Ber. C 60,58
Gef. C 60,50
H 4,84,
H 5,02.
UV-Spektrum: Max. = 225, 264, 300, 430 m// (log
4,52, 4,28, 4,15, 3,97, 4,05).
r
=
Opt. Drehung: [a]u= —64,8” (c=l,14 in Methanol).
Frangulin A-Acetat: Schmp. 191°.
C29H28014 (600,2)
Ber. C 59,59 H 4,83 CH3CO 29,46,
Gef. C 59,65 H 4,91 CH3CO 29,54.
Abb. 6. Glucofrangulin A.
Experimenteller Teil
2. Glucosidierung von Frangulin AB-Gemisch
zu Glucofrangulin A und B
1. Isolierung von Frangulin AB-Gemisch
und Frangulin A
Wir lösten 0,5 g Frangulin AB-Gemisch in 15 ml
Pyridin unter leichtem Erwärmen und gaben 0,3 g Sil-
beroxid zu. Nach Zugabe von 0.5 g Magnesiumsulfat
und 1.0 g a-Acetobromglucose, hergestellt nach
2
kg grob gepulverte Cortex Frangulae (Rhamnus
frangula) vermischten wir mit 10,0 dest. Wasser, lie-
l
ßen 12 Stdn. lang stehen und preßten danach ab. So-
wohl die Droge, als auch der in der Preßflüssigkeit
nach einiger Zeit ausgefallene Niederschlag wurden zu
20 H. P. H ö rh a m m e r, Dissertation, München 1966.
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SYNTHESE, STRUKTURBEWEIS VON GLUCOFRANGULIN
A
1413
schließend setzten wir die Acetylierung 2 Stdn. bei 70°
fort. Pyridin und Essigsäureanhydrid wurden im Va-
kuum entfernt, der verbliebene Rückstand mehrmals in
Äthanol gelöst und wieder zur Trockene eingedampft.
Den Rückstand lösten wir in heißem Methanol. Beim
Erkalten fielen weißliche, nadelförmige Kristalle aus
(Ausbeute 65 mg), die aus Methanol p.A. umkristalli-
siert wurden, Schmp. 230° (Lit. 12Schmp. 224—225°).
Glucofrangulin A-Acetat C43H45022 (913,4)
Ber. C 56,45 H 5,07 CH3CO 37,60,
Gef. C 56,26 H 4,98 CH3CO 37,21.
UV-Spektrum: Max. A = 212, 264, 360 (log f = 4,57,
4,56, 4,26).
Opt. Drehung: [a]r> = —124° (c = 1,16 in Aceton).
Barczai-Matos und
K
ö r ö S y 21 rührten wir am
Magnetrührer 2 Stunden. Nach erneuter Zugabe von
0,2 g MgS04 und 0,4 g a-Acetobromglucose wurde
nochmals 4 Stdn. gerührt und die Probe über Nacht
stehen gelassen. Die Reaktionslösung brachten wir in
die 20-fache Menge Eiswasser ein. Der sich unter wie-
derholtem Umrühren gebildete, körnige Niederschlag
wurde abgenutscht, mit 5-proz. eisgekühlter Essigsäure
und dann mit Eiswasser gewaschen. Der getrocknete
Rüdestand wurde in 10ml Methanol aufgenommen,
auf dem Wasserbad zum Sieden erhitzt und mit 1ml
20-proz. Natronlauge 3 Min. verseift. Die Probe wurde
dann mit Eisessig neutralisiert. Die chromatographische
Überprüfung auf Polyamidplatten in Methanol —Was-
ser (3:1) zeigte im Vergleich mit authentischem Gluco-
frangulin AB-Testgemisdi einen 7?/-Wert von 0,40 für
Glucofrangulin A und 0,30 für Glucofrangulin B.
NMR (i. CDC13, TMS int. Standard) : H-2,
d = 7,21;
H-4, d = 7,98; H-5, ö = 7,74; H-7, (3 = 7,17;
1 Glucosyl (7 Protonen), 1 Rhamnosyl (5 Pro-
tonen)
d = 4,70 —5,80; 1 Acetyl (3 Protonen)
d = 2,53; 1-C-Methyl (3 Protonen) ö = 2,50;
7 Acetyl (21 Protonen) ö = 2,3—2,0; Rham-
3. Säulenchromatographische Trennung der Glykoside
Zur Trennung des Glykosid-Gemisches benutzten wir
eine mit Polyamidpulver gefüllte Säule (Durchmesser
3 cm, Füllhöhe 30 cm). Die methanolische Lösung (ca.
10 ml) wurde vorsichtig mit einer Pipette auf die Säule
aufgetropft. Bei der Elution mit Wasser begann sich
eine rote Zone von der Startlinie abzusetzen, die sich
mit 20-proz. Methanol zu einer breiten roten Zone
entwickeln ließ. Diese bestand mit Ausnahme einiger
chromatographisch reiner Fraktionen aus Glucofrangu-
lin A und B. Die Mischfraktionen wurden nochmals in
gleicher Weise chromatographiert, wobei eine hellrote
und eine dunkelrote Zone auftrat. Das Elutionsvolu-
men hielten wir diesmal bei 50 ml und konnten damit
den größten Teil der hellroten Zone aus der Säule ab-
trennen. Da eine Kristallisation nicht gelang, dampften
wir die Lösungen zur Trockene ein und trockneten die
gelbbraune Substanz bei 70°. Ausbeute an Roh-Gluco-
frangulin A ca. 120 mg. Durch Steigerung der Metha-
nolkonzentration eluierten wir die dunkelrote Zone
aus der Säule. Ausbeute an Roh-Glucofrangulin B ca.
30 mg.
nose-Methyl (3 Protonen)
d = 1,24.
5. Direkte Glucosidierung von Frangulin A
Zur Glucosidierung von Frangulin A verwendeten
wir 500 mg reine Substanz. Das Kupplungsprodukt
wurde aber nach Entfernung der Silbersalze und des
Pyridins direkt wie unter 4. beschrieben zum Gluco-
frangulin A-Acetat acetyliert. Da eine Kristallisation
anfänglich Schwierigkeiten bereitete, reinigten wir die-
ses Acetylprodukt über eine Kieselgelsäule (0,2—0,5
mm) mit Chloroform—Methanol (99:1) als Lösungs-
mittel. Eine breite grüngraue Zone wurde in Fraktio-
nen zu 10 ml abgefangen und chromatographisch als
Glucofrangulin A-Acetat identifiziert. Sämtliche Eluate
wurden vereinigt, zur Trockene abgedampft und aus
Methanol p.A. umkristallisiert. Im Mischschmelzpunkt
mit dem nach 4. gewonnenen Acetat entstand keine De-
pression.
Herrn Privatdozent Dr. W. S t
e
g
l i c h , Technische
Hochschule, München, danken wir herzlich für die wert-
wolle Unterstützung bei der Diskussion der NMR-
Spektren.
4. Acetylierung von Glucofrangulin A
100 mg des amorphen Glucofrangulins lösten wir in
10 ml Essigsäureanhydrid und 5ml Pyridin und ließen
die Probe 24 Stdn. bei Zimmertemperatur stehen. An-
21 M. b a r c z a i-Ma t o S u. F. k ö r ö S y , Nature [London] 165,
369 [1950].
Unauthenticated
Download Date | 11/17/19 9:56 PM