FURTHER PEPTIDE SYNTHESES WITH PMZ AMINO ACIDS.

Full text of DOI:10.1515/znb-1965-0505

WEITERE PEPTIDSYNTHESE MIT pMZ-AMINOSÄUREN
429
Weitere Peptidsynthesen mit pMZ-Aminosäuren
F r ie d r ic h W ey g a n d u n d E c k h a r d N in tz
Organisch-chemisches Institut der Technischen Hochschule München
(Z. Naturforsdig. 20 b, 429—434 [1965] ; eingegangen am 5. März 1965)
Herrn Prof. Dr. R. T s c h e s c h e zum 60. Geburtstag gewidmet
Die Synthese der vollständig geschützten Sequenzen 12 —14 und 15 —19 des Glucagons mit
Hilfe von pMZ-Aminosäuren wird beschrieben. Als Argininderivat wurde A“-pMZ-./V(5•,/Vw-bis-Z-L-
Arginin eingesetzt, als Lysin-Derivat A^-pMZ-A^-Z-Lysin, und Serin und Tyrosin wurden in Form
der pMZ-O-Benzyläther verwendet. Zur Herstellung der Peptidbindung diente in allen Fällen Di-
cyclohexylcarbodiimid.
Der p-M ethoxybenzyloxycarbonyl-Rest1-3 er-
scheint wie der tert.-Butyloxycarbonyl-Rest zum vor-
übergehenden Schutz der Aminogruppe von Amino-
säuren bei Peptidsynthesen hervorragend geeignet,
da er mit wasserfreier Trifluoressigsäure bei 0° und
darunter ohne Hydrolyse der Peptidbindung abge-
spalten werden kann. Nachdem sich der pMZ-Rest
bereits bei der Synthese eines Heptapeptid-Derivates
aus y-L-Glutamylresten bewährt hatte 3, haben wir an
weiteren Beispielen seine Verwendbarkeit zum Auf-
bau von Peptiden geprüft. Hierfür wurden die
Sequenzen 12 —14 (Lys-Tyr-Leu) und 15 —19 (Asp-
Ser-Arg-Arg-Ala) des Glucagons 4 gewählt, die beide
trifunktionelle Aminosäuren enthalten.
Zervas und M itarbb. 5’6 das dreifach mit dem Carbo-
benzoxy-Rest geschützte Arginin in die Peptidchemie
ein. Bei ihm entfällt bei der Peptidknüpfung eine
sonst mögliche (intramolekulare) Lactambildung.
Der Nachteil dieses Arginin-Derivates ist lediglich
der, daß die selektive Abspaltung des A bständigen
Z-Restes nur schwer zu bewerkstelligen is t5. H in-
gegen ist der pMZ-Rest mit wasserfreier Trifluor-
essigsäure schon bei 0° entfernbar, ohne daß Carbo-
benzoxy-Reste angegriffen werden, zu deren Entfer-
nung mit Trifluoressigsäure erhitzt werden muß 7.
W ir haben daher in Analogie zu den Arbeiten von
Zervas et al. 5’ 6 zunächst die Möglichkeit der H er-
stellung von A“-pMZ-Arö,A^a'-bis-Z-L-Arginin unter-
sucht.
Na-pMZ-Derivate trifunhtioneller Aminosäuren
L-Arginin ließ sich mit pMZ-Azid in alkalischer
Lösung (pn 9 —9,5) unter Zusatz von Dioxan in
etwa 75-proz. Ausbeute in das krist. /V“-pMZ-L-
Arginin (I) verwandeln. Die weitere Umsetzung zum
Aa-pMZ-./V<5,./Va,-bis-Z-L-Arginin 8 (II) mit Carbobenz-
oxychlorid in verd. Natronlauge gelang nur, wenn
zur Erhöhung der Löslichkeit Dioxan zugesetzt
wurde. Andernfalls wurde es unverändert zurück-
erhalten. Die Ausbeute war mit 37% (nach Um-
kristallisation aus Essigester/Petroläther) relativ ge-
ring.
In früheren Mitteilungen wurden bereits drei mit
Hilfe von pMZ-Azid 2 hergestellte /Va-pMZ-Derivate
von trifunktionellen Aminosäuren beschrieben, näm -
lich /Va-pMZ-./V£-Z-L-Lysin2 sowie pMZ-L-Glutamin-
säure-a-benzylester und pMZ-L-Glutaminsäure-/?-ben-
zylester 3.
Wegen der bekannten Schwierigkeiten bei der
Synthese von Arginin-haltigen Peptiden führten
A b k ü r z u n g e n : pMZ = p-Methoxybenzyloxycarbonyl-.
Z = Benzyloxycarbonyl-, B = Benzyl-, DCCI = Dicyclo-
hexyl-carbodiimid.
W ü n s c h , C h e m . B e r . 98, 797 [1965]
u . J . J e n ts c h , 98, 803 [1965].
L. Z e r v a s , M. W in itz u . J. P. G r e e n s te in , J . o r g . C h e m is t r y
22, 1515 [1957],
L. Z e r v a s , M. W in itz u . J. P. G r e e n s te in , J. A m e r . c h e m .
S o c . 83,3300 [1961].
; E . W ü n s c h , F . D r e e s
1 F. M a c K a y u . N. F. A l b e r t s o n , J. Amer. chem. Soc. 79.
4686 [1957].
2 F. W e y g a n d u . K . H u n g e r , Chem. Ber. 95, 1 [1962].
3 F. W e y g a n d u . K . H u n g e r , Chem. Ber. 95, 7 [1962].
5
6
7
8
4
W . W . B r o m e r et al., J. Amer. chem. Soc. 79, 2789, 2801,
2805. 2807 [1957] ; H. C. B e y e r m a n u . J. S . B o n t e k o e , Rec.
trav. chim. Pays-Bas 81, 699 [1962], 83. 255 [1964]; E.
\X^ünsch u. A. Z w ic k , Chem. Ber. 97, 2497 [1964] ; E.
F . W e y g a n d u . W . S t e g l i c h , Z . N a t u r f o r s d i g . 14 b. 472
[1959].
W ü n s c h u . G.
W
e n d l b e r g e r , 97, 2504 [1964] ; E. S c h r ö d e r ,
D ie S t e ll u n g d e r b e id e n Z - R e s te w ir d i n A n a l o g ie z u r T r is -
Z - V e r b in d u n g v o n Z e r v a s e t a l. 6 f o r m u li e r t .
Liebigs Ann. Chem. 670, 127 [1963] ; 681, 231 [1964] ; E.
I. Frauenklinik und Hebnmmcnschule
der Univsrs:1-: Ufnauthenticated
M ü n c h e n 1 5 ,
'
a ß e 11
Download Date | 11/17/19 11:34 PM
ß u c ii j i o i

FR. WEYGAND UND E. NINTZ
430
Aus II läßt sich der Abständige pMZ-Rest mit
und 7,5 ml 4-n. NaOH gegeben (pn 9 —9,5). Unter
Eiskühlung erfolgte die Zugabe von 5,7 g (27,5 mMol)
pMZ-Azid 2 in 35 ml Dioxan. Innerhalb 24 Stdn. fügte
man weitere 12,5 ml 4-n. NaOH in Portionen zu. Dar-
aufhin wurde nochmals 24 Stdn. gerührt. Von etwas
Ungelöstem wrurde filtriert, das Filtrat zweimal mit
Äther ausgezogen, mit konz. Salzsäure auf pn 3 ge-
bracht und zweimal mit Essigester ausgezogen. Sodann
neutralisierte man die wäßrige Lösung mit Ammoniak,
dampfte i. Vak. zur Trockne ein und löste den Rück-
stand unter Zugabe von etwas Ammoniak (pn 8) in
85 heißem Wasser. Bei mehrstündigem Stehen bei
Zimmertemperatur krist. yV2-pMZ-L-Arginin in harten,
nadeligen Kristallen. Ausbeute 6,28 g (74,3%), Schmp.
Trifluoressigsäure in der Kälte abspalten. Ferner ist
mit Diazomethan der Methylester von II leicht zu-
gänglich.
NH.,
N H -Z
C= NH
N -Z
1
1
C= NH
1
NH
1
1
L -A rg in in ->
(CH2)3
H -C -N H -p M Z
c o 2h
—>
(CH2)3
H - C - N H
CO,H
181 —182'. [a]
C15Ho2N40 5 (338,4)
Ber. C 53,25 H 6,55 N 16,56,
: +4,1 (c = 1,5 in Eisessig).
(II)
(I)
Aus L-Asparaginsäure-/?-benzylester 10 wurde ohne
Schwierigkeiten die pM Z-Verbindung gewonnen
(Ausbeute 51% ). Dasselbe gilt für pMZ-0-Benzyl-
L-serin 9 (Ausbeute 73% ). Zur Darstellung von pMZ-
O-Benzyl-L-tyrosin mußte wegen der Schwerlöslich-
keit wiederum in Dioxan-Natronlauge bei der Um-
setzung mit pMZ-Azid gearbeitet werden (Ausbeute
35% ). Damit sind alle für die beabsichtigten Peptid-
synthesen notwendigen pMZ-Verbindungen zugäng-
lich. Im Versuchsteil beschreiben wir außerdem noch
pMZ-L-Isoleucin und pMZ-L-Valin.
Gef. C 52,87 H 6,67 N 16,54.
Na-pMZ-Nö,N0)-bis-Z-L-Arginin (II)
Zu der auf 3° gekühlten Lösung von 47,7 g Va-pMZ-
L-Arginin (I) (141 mMol) in 280 ml 2-n. NaOH und
100 ml Dioxan gab man abwechselnd 2-n. NaOH (ins-
gesamt 353 ml) und Carbobenzoxychlorid (96 ml) in-
nerhalb einer Stde. unter kräftigem Rühren hinzu.
Nach weiterem 1-stdg. Rühren wurde gekühlt und der
farblose Niederschlag abgesaugt. Das Natriumsalz
wurde mit 180 ml 5-proz. kalter Sodalösung gewaschen
und sodann in 1 / Chloroform gelöst. Die Chloroform-
phase wurde mit 90 ml kalter 5-proz. Sodalösung ge-
waschen und mit Natriumsulfat getrocknet. Beim Ein-
dampfen i. Vak. hinterblieb ein öliger Rückstand, der
beim Digerieren mit 1 / trockenem Äther innerhalb
von 12 Stdn. kristallisierte. Nach dem Trocknen des
abgesaugten Natriumsalzes betrug die Ausbeute 65
Gramm.
Peptidsynthesen
Alle Peptidbindungen wurden mit Hilfe von Di-
cyclohexyl-carbodiimid hergestellt, und die Abspal-
tung der pMZ-Reste geschah m it Trifluoressigsäure
unter Zusatz von Anisol (vgl.2,3), worauf die
Peptid-Derivate mit freier Aminogruppe häufig als
Hydrochloride isoliert wurden.
Es wurde durch mehrminütiges Kochen in 500 ml
abs. Äthanol gelöst. Beim Stehen bei 4° schied sich aus
der filtrierten Lösung ein zähflüssiges Öl aus, das noch-
mals mit sied. Äthanol behandelt wurde. Beim Ab-
kühlen schieden sich schmierige Kristalle (35 g) ab.
Die Synthese der vollständig geschützten Teil-
sequenzen 15 —19 des Glucagons geschah nach
Schema A, die der Sequenz 12 —14 nach Schema B.
Die Ausbeuten beziehen sich auf die jeweils umkrist.
Verbindung.
Sie wurden in 1400 ml Essigester suspendiert und
unter Schütteln durch Zugabe von 350 ml 2-proz. kalter
Schwefelsäure in Lösung gebracht. Die abgetrennte
Essigesterphase wusch man mit 350 ml 2-proz. Schwe-
felsäure, trocknete sie mit Magnesiumsulfat und
dampfte i. Vak. ein. Den krist. Rückstand saugte man
nach Digerieren mit Petroläther ab. Nach Umkrist. aus
Essigester/Petroläther 31,6 g (37%), Schmp. 135 bis
136". [a] 54«: + 14,0" (c = 1,5 in Äthanol).
Der D e u t s c h e n F o r s c h u n g s g e m e i n s c h a f t
danken wir für Unterstützung.
B eschreibung der V ersuche
(Schmp. unkorrigiert)
Na-pMZ-L-Arginin (I)
C31H34N40 9 (606,6)
Ber. C 61,38 H 5,65 N 9,24,
Gef. C 60,97 H 5,91 N 9,25.
5,27 g (25 mMol) L-Arginin-monohydrochlorid wur-
den in 30 ml 1-m. Natriumhvdrogencarbonat-Lösung
n Herrn Dr. E.
sung von O-Benzyl-L-serin;
D e u f e l u . A. Z w i c k . Chem. Ber. 91. 5 3 9 [ 1 9 5 8 ] .
W
ü n s c h danken wir herzlich für die Überlas-
10 A. B e r g e r u. E. K a t c h a l s k y , J. Amer. chem. Soc. 73, 4084
[1951] ;L. K i s f a l u d y et al., Chimia 14, 368 [1960] ; D. B e n -
I s h a i u. A. B e r g e r , J. org. Chemistry 17, 1564 [1952].
W
.
G r a s s m a n n , E.
W ü n s c h , P.
Unauthenticated
Download Date | 11/17/19 11:34 PM

431
WEITERE PEPTIDSYNTHESE MIT pMZ-AMINOSÄUREN
18
Arg
19
Ala
17
Arg
16
Ser
15
Asp
I
14
Leu
13
Tyr
12
Lys
bisZ
pMZ / OH
OB
OB
OCH,
pMZ
/ OH
II
V
^/bisZ
pMZ
/ B
o c h 3
pMZ
VI
XIII
XIV
XV
^ b isZ
bisZ
OH
/ z
/
/
B
/
OB
OB
OB
OB
OB
OB
pMZ
II
HCl
/
OH
f ;!c c o , h
OCH,
o c h 3
OH
pMZ
VII
^ b isZ
^bisZ
^ b isZ
bisZ
B
/b isZ
/
/
/
pM Z-
HC1-
pMZ
pMZ
pMZ
VIII
^.bisZ
IX
/ B
/ B
^ O H
pM Z-
III
XVI
XVII
^ b isZ
B
/ B
/
tv"1\/t7
piVIZi
NHNH,
X
bisZ
XI
OB
! /
pMZ
0H F:)CCOoH
,OB
bisZ
A
bisZ
1 /
i /
pMZ
XII
S c h e m a
B
S c h e m a
NÖ,N"'-Bis-Z-L-Arginin
g (24,8 mMol) der voranstehenden Verbindung
Menge Diazomethan in Äther versetzt. Nach 2 Stdn.
wurde eingedampft, der Rückstand in Essigester gelöst
und mit Bicarbonatlösung geschüttelt. Nach dem Trock-
nen der Essigesterphase und Eindampfen erfolgte Um-
krist. aus Methanol. Ausbeute 2,8 g (90%), Schmp.
108-110°, [a] “ e: + 10,3°( c = 1,5 in THF).
15
wurden mit 8,9 ml Anisol versetzt, worauf man bei
— 10° 42 ml Trifluoressigsäure innerhalb 15 Min. zu-
tropfte. Sodann wurde die Trifluoressigsäure i.Vak.
abgedampft, der Rückstand mit Äther überschichtet
und so viel Tetrahydrofuran zugegeben, daß sich der
Sirup gerade löste. Nach Zugabe von Triäthylamin
(pH 7,5) fiel die Verbindung, vermutlich zusammen mit
Triäthylamin-trifluoracetat, in voluminöser Form aus.
Den abgesaugten Niederschlag digerierte man mit Was-
ser und saugte ihn erneut ab. In heißem Methanol ge-
löst und nach dem Abkühlen vorsichtig mit Wasser ver-
setzt kristallisierte die Verbindung in körniger Form.
Ausbeute 11,1 g (97%), Schmp. 143 —144°, Misch-
schmp. mit dem Präparat von Z e r v a s et a l.5 (von
Herrn Prof. Z e r v a s erhalten) ohne Erniedrigung.
Q^Hse^Og (620,77)
Ber. C 61,93 H 5,85 N 9,03,
Gef. C 62,02 H 6,13 N 9,07.
pMZ-O-Benzyl-h-serin (III)
3,62 g (20 mMol) O-Benzyl-L-serin9 wurden in
40 ml Wasser gelöst mit 1,6 g (40 mMol) Magnesium-
oxyd und 4,6 g (22 mMol) pMZ-Azid in 40 ml Dioxan
2 Tage bei Raumtemperatur gerührt. Nach der üb-
lichen Aufarbeitung krist. die Verbindung bei der Be-
handlung mit Petroläther und vorsichtiger Zugabe von
Essigester. Ausbeute 4,9 g (73%), Schmp. 72 —73°.
[a] He: +16,2° (c = 2 in Äthanol).
C,2H26N4<V H ,0 (460,5)
Ber. C 57,38 H 6,13 N 12,17,
Gef. C 57,37 H 6,04 N 12,29.
Na-pMZ-N6,Nc>-bis-Z-t-Arginin-methytester
C19H21N 06 (359,4)
Ber. C 63,50 H 5,89 N 3,90,
Gef. C 63,63 H 6,08 N 4,06.
3,05
g (5 mMol) der voranstehenden Verbindung in
40 ml Tetrahvdrofuran wurden mit einer ausreichenden
Unauthenticated
Download Date | 11/17/19 11:34 PM

FR. WEYGAND LLND E. NINTZ
pMZ-h-Asparaginsäure-ß-benzylester (IV)
(13,7 mMol) L-Asparaginsäure-/?-benzylester
432
Na-pMZ-N6,NCJ-bis-Z-L-Arg-Nd.N,'-bis-Z-L-Arg-L-Ala-OB
(VIII)
3,05
g
10
g
(16,6 mMol) aus dem Hydrochlorid (voran-
wurden in 30 ml Wasser suspendiert und mit 1,2 g
(30 mMol) Magnesiumoxyd gerührt, wobei der Ester
langsam in Lösung ging. Nach 20 Min. wurden 4,6 g
(22 mMol) pMZ-Azid in 30 ml Dioxan zugefügt. Nach
3-tägigem Rühren wurde das überschüssige Magne-
siumoxyd abfiltriert, das Filtrat i. Vak. zur Trockne
eingedampft und der feste Rüdestand mit Äther gewa-
schen. Nach der Behandlung mit Dowex-50 (H®-Form)
in Wasser und übergeschichtetem Essigester wurde aus
Benzol umkristallisiert. Ausbeute 2,82 g (51%), Schmp.
96 —99°. [a] 54«: + 8,4° (c = 1,5 in Äthanol).
stehend) mit 1,72 g (2,38 ml, 17 mMol) Triäthylamin
freigesetzter A/^A^-bis-Z-L-Arginyl-L-alaninbenzylester
und 8,6 g (14,2 mMol) A^MZ-TV^A^-bis-Z-L-Arginin
wurden in 100 ml Methylenchlorid gelöst. Nach Küh-
lung auf —15° gab man die ebenfalls auf diese Tem-
peratur gebrachte Lösung von 3,70 g (18 mMol) DCCI
in 40 ml Methylenchlorid zu und bewahrte 3 Tage bei
— 10° auf. Nach üblicher Aufarbeitung farbloses Pul-
ver, nach Umkristallisation aus Essigester 13,1 g
(84%), Schmp. 1 2 9 -1 3 2 °, [<z] E .: -5 ,7 ° (c = 2 in
Dimethylformamid).
C19H23N 07 (405,4)
C63H69N90 15 (1192,3)
Ber. C 59,25 H 5,72 N 3,46,
Ber. C 63,46 H 5,83 N 10,57,
Gef. C 59,99 H 5,48 N 3,86.
Gef. C 63,17 H 6,11 N 10,41.
pMZ-O-Benzyl-L-tyrosin (V)
[ Ni ,Nw-Bis-Z-L-Arg]2-L-Ala-OB-hydrochlorid (IX)
7,3 g (27 mMol) O-Benzyl-L-tyrosin wurden in 35 ml
1-m. NaHC03 , 4,5 ml 4-n. NaOH und 30 ml Dioxan
gelöst. Nach Zusatz von 6,15 g (30 mMol) pMZ-Azid
wurde 5 Tage gerührt. Nach üblicher Aufarbeitung
kristallisierte die Verbindung beim Behandeln mit Pe-
troläther/Essigester. Ausbeute 4,2 g (35%), Schmp.
10,2
g (8,6 mMol) der voranstehenden Verbindung
wurden mit 4,4 ml Anisol und 17,5 ml Trifluoressig-
säure bei —10° 15 Min. stehen gelassen und daraufhin
noch 1 Stde. bei Raumtemperatur. Das beim Eindamp-
fen i. Vak. (Bad 20°) hinterbleibende Ol wurde in
Äther gelöst und durch Einleiten von HCl-Gas als Hy-
drochlorid gefällt. Ausbeute 8,7 g (95,5%) (nach Trock-
nen über KOH).
1 1 6 -1 1 7 °, [a]
+15,0° (c = 2 in Äthanol).
C25H25NO« (435,5)
Ber. C 68,95 H 5,79 N 3,22,
Gef. C 68,49 H 5,86 N 3,39.
pMZ-0-B-L-Ser-[Nd,N°J-bis-Z-L-Arg]2-L-Ala-0B (X)
P e p t i d s y n t h e s e n
8
g (7,8 mMol) aus dem voranstehenden Hydrochlo-
rid mit 0,83 g Triäthylamin (1,15 ml, 8,2 mMol) frei-
gemachter Ester und 4,3 g (12 mMol) pMZ-O-B-L-Serin
wurden in 80 ml Methylenchlorid gelöst und unter
Kühlung mit Eis-Kochsalz mit der Lösung von 2,08 g
(13 mMol) DCCI in 30 ml Methylenchlorid versetzt.
Nach viertägigem Aufbewahren bei —10' wurde in üb-
licher Weise aufgearbeitet. Nach Umkrist. aus Essig-
ester 7,5 g (76%), Schmp. 154 —158°, [aJÜÜe: —6,0"
Na-pMZ-N8,N“-bis-Z-L-Arg-L-Ala-OB (VI)
16,7 g (27,5 mMol) A^-pMZ-A^A^-bis-Z-L-Arginin
und 6,72 g (37,5 mMol) L-Alaninbenzylester wurden in
120 ml Methylenchlorid gelöst. Nach Kühlung auf
—15° wurden 6,7 g (32,5 mMol) DCCI in 45 ml Me-
thylenchlorid ( —15°) zugefügt. Nach 3-tägigem Stehen
bei —10° wurde in üblicher Weise aufgearbeitet. Aus
heißem Essigester (+ wenig Petroläther) schneeweißes
Pulver. Ausbeute 18,6 g (87%), Schmp. 162 —163°,
[a] sie: —1,4° (c = 1,5 in Dimethylformamid).
(c
=
2 in Dimethylformamid). Aminosäure-Analyse
(nach Totalhydrolyse) Arg 1,86; Ser 1,01; Ala 1,04.
C73H80N10O17 (1369,5)
Ber. C 64,02 H 5,89 N 10,23,
Gef. C 63,97 H 6,05 N 10,20.
C4iH45N5o10 (767,8)
Ber. C 64,13 H 5,91 N 9,12,
Gef. C 64,13 H 5,90 N 9,52.
0-B-L-Ser-[Nd,NÜJ-bis-Z-L-Arg]2-L-Ala-0B-trifluor-
acetat (XI)
Nd,NlJ-bis-Z-L-Arg-L-Ala-OB-hydrochlorid (VII)
13
g (17 mMol) der voranstehenden Verbindung
6,8
g (5 mMol) der voranstehenden Verbindung
wurden mit 8,6 ml Anisol versetzt, und binnen 15 Min.
fügte man 34,5 ml Trifluoressigsäure bei —10 trop-
fenweise zu. Nach 1-stdg. Stehen bei Raumtemperatur
wurde i. Vak. eingedampft und der sirupöse Rückstand
nach Lösen in Äther durch Einleiten von HCl-Gas bei
—15° in das krist. Hydrochlorid verwandelt. Die Ver-
bindung ist hygroskopisch. Ausbeute 10,6 g (98%).
wurden mit 2,5 ml Anisol und 10 ml Trifluoressigsäure
10 Min. bei —10° stehen gelassen. Nach weiteren
2 Stdn. bei 0 wurde im Hochvakuum (Bad —5 —0°)
unter Zwischenschaltung einer mit flüssiger Luft ge-
kühlten Falle eingedampft.
Ausbeute 5,9 g (90%). Es wurde ohne Reinigung
für die nächste Stufe verwendet.
Unauthenticated
Download Date | 11/17/19 11:34 PM

1
WEITERE PEPTIDSYNTHESE MIT pMP-AMINOSÄUREN
433
pMZ-ß-0B-L-Asp-0-B-L-Ser-[Nd,Nl"-bis-Z-L-Arg]^-L-
C46H56N4O10 (825,0)
Ber. C 66,97 H 6,84 N 6,79,
Ala-OB (XII)
Gef. C 67,25 H 7,11 N 6,95.
5,4
g (4,48 mMol) mit 0,45 g Triäthylamin (0,63 ml,
4,48 mMol) aus der voranstehenden Verbindung frei-
gesetzter Tetrapeptidester und 2,4 g (6,2 mMol) pMZ-
L-Asparaginsäure-/5-benzylester wurden in 60 ml Me-
thylenchlorid gelöst und auf —15° gekühlt. Man fügte
die ebenfalls gekühlte Lösung von 1,44 g (7 mMol)
DCCI in 15 ml Methylenchlorid hinzu und ließ 6 Tage
bei 0° stehen. Erst durch wiederholtes Lösen und Ein-
engen in Acetonitril und Kühlen gelang in diesem
Falle die vollständige Abtrennung des gebildeten Di-
cyclohexylharnstoffes. Nach Umkrist. aus Essigester
Ausbeute 5,32 g (75,5%), Schmp. 143 —148°, [a]M6:
Na-pMZ-N^Z-h-Lys-O-B-b-Tyr-h-Leu-OH (XVI)
Die Lösung vonl,2 g (1,45 mMol) der voranstehen-
den Verbindung in 13,5 ml Dioxan und 6,8 ml Metha-
nol wurde mit 4,1 ml 0,5-n. NaOH versetzt und 1 Stde.
bei Zimmertemperatur stehen gelassen. Sodann wurde
unter Rühren mit 0,5-proz. Citronensäurelösung ver-
setzt bis pn 4,5 erreicht war. Dabei fiel die Verbindung
aus. Aus Essigester umkristallisiert. Ausbeute 1,15 g
(97%), Schmp. 1 3 9 -1 4 2 °, [a] II»: -1 2 ,8 ° (c = 1 in
Dimethylformamid).
—1,7° (c
1,5 in Dimethylformamid).
C45H54N4O10 (811,0)
C84H91N11O20 (1574,7)
Ber. C 66,65 H 6,71 N 6,91,
Gef. C 66,72 H 6,97 N 7,17.
Ber. C 64,07 H 5,83 N 9,79,
Gef. C 63,32 H 5,79 N 9,51.
Na-PMZ-N£-Z-h-Lys-0-B-L-Tyr-ij-Leu •NHNH2 (XVII)
pMZ-O-B-L-Tyr-L-Leu-OCH3 (XIII)
1,59 g (1,96 mMol) iVa-pMZ-./Vf-Z-L-Lys-0-B-L-Tyr-L-
Leu-OCH3 wurden in 10 ml Methanol und 3 ml Dioxan
gelöst. Nach Zugabe von 0,33 ml Hydrazinhydrat wurde
5 Stdn. unter Rückfluß erhitzt. Nach dem Abkühlen
fiel der größte Teil des gebildeten Hydrazids aus, wei-
teres beim Einengen der Mutterlauge. Nach Umkristal-
lisation aus Methanol 1,28 g (80%), Schmp. 201 bis
203°, [a]^«: —19,8° (c = 1 in Dimethylformamid).
1,9
g (4,4 mMol) pMZ-O-B-L-Tyrosin und l g (6,9
mMol) L-Leucinmethylester wurden in 25 ml Methylen-
chlorid bei —15° mit 1,44 g DCCI (6,9 mMol) ver-
setzt. Nach 3 Tagen wurde aufgearbeitet und aus Essig-
ester/Petroläther umkristallisiert. Ausbeute 1,97 g
(80%), Schmp. 1 2 9 -1 3 1 °, [<z] E .: -1 1 ,6 ° (c =1,5
in Äthanol).
C3,H 38N ,0 7 (562,7)
C45H56NRO9 (825,0)
Ber. C 68,31 H 6,81 N 4,98,
Gef. C 68,15 H 7,11 7 4,96.
Ber. C 65,52 H 6,84 N 10,20,
Gef. C 65,18 H 6,74 N 10,13.
0-B-L-Tyr-L-Leu-OCH3-trifluoracetat (XIV)
pMZ-0-B-L-Ser-[Nd,N0J-bis-Z-L-Arg]r L-Ala-0H
3,94 g (7 mMol) der voranstehenden Verbindung
wurden mit 2,5 ml Anisol und 12 ml Trifluoressigsäure
bei —10^ versetzt. Nach 1-stdg. Aufbewahren bei 0°
wurde im Hochvakuum (Bad 0°) eingedampft und der
Rückstand mit Äther/Petroläther digeriert, wobei er
kristallisierte. Ausbeute 3,49 g (97%), Schmp. 115 bis
116°.
Die Lösung von 0,3 g (0,22 mMol) pMZ-O-B-L-Ser-
[Ar‘5,Arw-bis-Z-L-Arg]2-L-Ala-OB in 6,6 ml Dimethylsulf-
oxyd wurde nach Zugabe von 0,33 ml 1-n. NaOH
20 Stdn. bei Raumtemperatur stehen gelassen. Durch
Zugabe von Eisessig wurde angesäuert und durch Ein-
rühren in 35 ml 2-proz. NaCl-Lösung das Produkt ge-
fällt. Nach dem Absaugen und Waschen mit Äther
wurde zunächst im Vakuumexsikkator getrocknet und
sodann aus Pyridin/Wasser umgefällt und wieder ge-
trocknet. Ausbeute 0,134 g (47%), Schmp. 168 —172^.
C23H.50N.,O4-C,HF3O.> (512,5)
Ber. C 58,59 H 6,10 N 5,47,
Gef. C 58,45 H 6,18 N 5,45.
CH6H74N10O17 (1279,4)
Ber. C 61,96 H 5,83 N 10,95,
Gef. C 61,96 H 5,67 N 10,90.
Na-PMZ-Nt-Z-L-Lys-0-B-L-Tyr-i.-Leu-0CH.i (XV)
2,71 g (6,8 mMol) aus dem Trifluoracetat mit 0,71 g
Triäthylamin (0,98 ml, 7 mMol) freigesetzter Dipeptid-
ester und 2,82 g (6,3 mMol) A^-pMZ-A^-Z-L-Lysin
wurden in 50 ml Methylenchlorid bei —15° mit 1,65 g
(8 mMol) DCCI in 15 ml Methylenchlorid versetzt.
1 Tag lang wurde bei dieser Temperatur und 2 Tage
lang bei Raumtemperatur aufbewahrt. Das aus Essig-
ester umkristallisierte Peptid gab das Lösungsmittel
nur schwer ab. Ausbeute 3,4 g (65%), Schmp. 162 bis
164°, [a] IJ«: —19,9 (c = 2 in Dimethylformamid).
pMZ-L-Isoleucin
6,5
g (50 mMol) L-Isoleucin wurden unter Zusatz
von 4 g Magnesiumoxyd in 100 ml Wasser mit der
Lösung von 11,4 g pMZ-Azid in 100 ml Dioxan 3 Tage
lang gerührt. Nach Abfiltrieren von nichtverbrauchtem
Magnesiumoxyd und Ausschütteln mit Äther zur Ent-
fernung von überschüssigem pMZ-Azid wurde die
wäßrige Lösung mit Essigester überschichtet und mit
Unauthenticated
Download Date | 11/17/19 11:34 PM

B. DUHM. W. MAUL, H. MEDENWALD, K. PATZSCHKE UND L. A. WEGNER
434
Dowex 50 (H®-Form) gerührt. Die Essigesterlösung
lieferte beim Eindampfen i. Vak. zunächst öliges pMZ-
L-Isoleucin, das, in Benzol gelöst, mit Dicyclohexylamin
pMZ-h- Valin
Die Darstellung erfolgte analog der voranstehenden
Verbindung. Nach der Reinigung über das Dicyclo-
hexylammoniumsalz (Schmp. 168 , aus Alkohol/Pe-
troläther, farblose Nadeln) und Zerlegung mit Do-
wex 50, Ausbeute 55%, Schmp. 62 —63", [a]ü% :
—1,8° (c = 2 in Eisessig).
versetzt
wurde.
Das
Dicyclohexylammoniumsalz
(Schmp. 144 —145°, aus Alkohol/Petroläther farblose
Nadeln) lieferte nach der Zerlegung mit Dowex 50
9,5 g (65%) pMZ-L-Isoleucin in schönen Nadeln, Schmp.
64 —66 ,
C15H21N 05 (295,4)
Ber. C 61,00 H 7,17 N 4,74,
Gef. C 61,08 H 7,31 N 4,70.
+12,4° (c = 2 in Eisessig).
C14H19N 05 (281,3)
Ber. C 59,77 H 6,81 N 4,98.
Gef. C 59,97 H 6,99 N 5,17.
Tierexperimentelle Untersuchungen mit a-Methyl-Dopa-1lC
unter besonderer Berücksichtigung der optischen Isomeren
I. M itt.: Synthese, Resorption, Ausscheidung und M etabolism us
B. D uhm , W . M a u l, H. M e d e n w a ld , K. P a tz s c h k e und L. A. W e g n e r
Isotopenlaboratorium der Farbenfabriken Bayer AG, Werk Elberfeld
(Z. Naturforschg. 20 b, 434—445 [1965] ; eingegangen am 23. Dezember 1964)
Es wird die Synthese von d( + )- und l( —) -a-Methyl-Dopa-[/?-14C] beschrieben. — Tierexperi-
mentelle Untersuchungen mit der radioaktiv markierten Substanz an der Ratte ergaben, daß L-a-
Methyl-Dopa nach oraler Gabe mit ca. 40% etwa viermal besser als n-a-Methyl-Dopa resorbiert
wird. Nach intravenöser Applikation werden mehr als 95% der Aktivität renal eliminiert, wobei die
Ausscheidung nach Applikation der optischen Isomeren zunächst schnell, aber mit unterschiedlicher
Geschwindigkeit erfolgte. — Die zweidimensionale Trennung der im Urin enthaltenen Aktivität
zeigte, daß sowohl d - als auch L-a-Methyl-Dopa überwiegend unverändert ausgeschieden werden.
Nach Applikation des rechtsdrehenden Isomeren liegen etwa 10% als Metaboliten vor, nach Gabe
der linksdrehenden Form sind es etwa 25%, wobei (3'-0-Methyl)-a-Methyl-Dopa jeweils eines der
Hauptstoffwechselprodukte ist. Trotz der zunächst sehr schnellen Elimination der unveränderten
Substanz ist diese auch noch zu späteren Zeiten z. B. 10 Stdn. nach intravenöser Applikation im
Urin zu finden, allerdings überwiegt in diesem Zeitabschnitt die Elimination der Metaboliten. Im
Gegensatz zur D-Form wird nur L-a-Methyl-Dopa von der Ratte decarboxyliert, so daß auch nur
nach Gabe von L-a-Methyl-Dopa radioaktive Amine und Ketone — in gepaarter Form — im Urin
nachgewiesen werden konnten.
deren A u to ren (L it. b ei H eilm eyer u n d H o l t m e ier 2)
u n tersu ch ten vor allem d er A rb eitsk reis u m H oltz 3
so w ie Carlson u n d l in d q u ist 4 d ie p h a r m a k o lo g i-
schen u n d b ioch em isch en G ru n d la g en der a-M ethyl-
D o p a -T h era p ie u n d en tw ick elten V o r ste llu n g e n ü b er
den W irk u n g sm ech a n ism u s d iese r S u b sta n z. K r e is-
la u fa n a ly tisch e V ersu ch e nach V era b reich u n g v o n
Die Einführung von L-a-Methyl-Dopa[l ( —) -3-
(3 .4 - Dihydroxyphenyl) - 2 - methylalanin] in die
Therapie des Hochdruckes hat — abgesehen von kli-
nischen Gesichtspunkten — zahlreiche pharm akologi-
sche und biochemische Probleme aufgeworfen. Aus
diesem Fragenkomplex interessierte uns vor allem
das Schicksal der intravenös und oral verabreichten
Substanz im Säugetierorganism us.
L -a-M ethyl-D op a fü h rte K roneberg 5 durch.
— Ü b er
V erteilu n g , A u ssch eid u n g u n d M eta b o lism u s b ei der
R atte b erich teten zu erst P orter u n d t itus 6, w äh ren d
b uHs et a l . 7 k ü rzlich ü b er d en S toffw ech sel v o n
S jo e r d sm a und U d e n fr ie n d 1 wiesen als erste die
blutdrucksenkende W irkung des a-Methyl-Dopa
beim Hochdruckkranken nach. Neben zahlreichen an-
° G. K r o n e b e r g , in: L . H e i lm e y e r u . H . J. H o l t m e i e r , Thera-
pie des Bluthochdruckes, Verlag für Gesamtmedizin, Ber-
lin-Freiburg/Br. 1963.
1 J. A. O a t e s , L. G i l le s p ie j r . , S . U d e n f r i e n d and A.
S jo e r d s m a , Science [Washington] 131, 1890 [I960].
2 L. H e ilm e y e r u . H . J. H o l t m e i e r , Therapie des Bluthoch-
druckes, Verlag für Gesamtmedizin, Berlin-Freiburg/Br.
1963.
3 P. H o l t z , in: L. H e ilm e y e r u . H . J. H o l t m e i e r , Therapie
des Bluthochdruckes, Verlag für Gesamtmedizin, Berlin-
Freiburg/Br. 1963.
r> C. C. P o r t e r and D. C. T i tu s , J. Pharmacol, exp. Thera-
7 pRe.uPt..139, 77 [1963].
B u h s , J. L . B e c k , O. C . S p e t h , J. L . S m ith , N. R.
T r e n n e r , P. C . C a n n o n and J. H. L a r a g h , J. Pharmacol,
exp. Therapeut. 143, 205 [1964].
4 A. C a r ls o n u . M. L in d q u is t, Acta physiol, scand. 54. 87
[1962].
Unauthenticated
Download Date | 11/17/19 11:34 PM